Diferencias bacterias de levaduras

DIFERENCIACÓN DE BACTERIA Y LEVADURAS Y CULTURA PURA

INTRODUCCIÓN

Un error común a la hora de observar tinciones de Gram es confundir hongos (levaduras) con bacterias, debido a la contaminación del cultivo bacteriano durante su realización. sin embargo la presencia de algunas características marcantes permiten diferenciar ambos tipos de microorganismos; por un lado las bacterias son células tan pequeñas que se miden en micras (µ). El tamaño oscila entre 0.5-5 µ de diámetro y de 2 a 5 micras de longitud, existiendo en diferentes formas tales como: Esférica o de coco, la forma alargada o de bacilo y las formas espirales de las cuales son subgrupos los vibriones, espirilos y espiroquetas. Ya por su parte las levaduras en general son células de tamaño mayor que las bacterias oscilando entre 1 y 5 µm de anchura y 5 y 30 µm de longitud, siendo este el criterio de mayor peso para su diferenciación.

OBJETIVOS

Identificar microscópicamente bacterias y levaduras de una cultura contaminada y practicar la técnica de cultura pura.

MATERIALES Y METODOS

PROCEDIMIENTO

Para la identificación de bacterias y levaduras, empezamos con la utilización de una placa conteniendo una cultura contaminada,  y observamos macroscópicamente y después realizamos la coloración de gram para cada una de la posibles diferentes colonias.

1. Preparo del estendido en el porta objetos

1. Limpie un porta objetos de vidrio con alcohool e papel fino.
2. Flambear el alza de inoculación, manteniendo la en contacto con la llama hasta que quede totalmente roja y utilizela para colocar una gota de agua(tubo de ensayo conteniendo agua destilada esterelizada), sobre la superficie de la lamina.
3. Flambear de nuevo el alza en el mechero de Bunsen y dejela enfriar proximo a la llama y retire una pequeña porción de la colonia de microorganismos a ser observados.
4. Tranferir la cultura para la gota de agua en lámina, esfregando el alza sobre la superficie y esparciendo el contenido en una capa fina y uniforme, en el centro de la lamina.
5. Pase el porta objetos sobre la llama (con el inoculo para arriba) dos o tres veces seguidas.
6. Deje secar y realice la coloración de Gram a seguir a continuación.

1. Tinción de GRAM

Observaciones: Tenga a la mano un cronometro para contabilizar el tiempo de contacto con los colorantes y cuando proceda a lavar la lamina, abra parcialmente el flujo de agua en la pila.

1. Coloque en el porta objetos cantidad suficiente de cristal violeta para cubrir el estendido y deje en reposo por un minuto.
2. Lave con água y coloque la misma cantidad de lugol y deje en reposo por un minuto .
3. Lave con alcohool por 30 segundos y enseguida con água.
4. Cubra el estendido con el contra-colorante safranina para Gram y deje en reposo por 10 segundos.
5. Lave con água y deje secar el porta objetos para luego examinar al microscopio.

1. Observación al microscopio

1. Observe las laminas previamente teñidas por la tecnica de tinciòn de Gram en el microscopio del laboratorio, anote las caracteristicas en el cuadro 1 y dibuje lo que observa.

RESULTADOS Y DISCUCIÓN

Como resultado, se verifico que la colonia 1 estava contaminda; presentando tanto bacterias Gram positivas como negatvias en formato de coco y bacilo ademas de algunas levaduras, siendo reconocidas por su gran tamaño en relación a las bacterias. Ya para la segunda colonia, se verifico una pureza en el cultivo siendo solamente observado bacterias de tipo Gram positivo y de formato de coco (Figura 1 & Cuadro 1).[pic 1]

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