Extração de DNA

1. Introdução: 

    Todos os organismos vivos armazenam todas as informações genéticas codificadas e contidas nos ácidos nucléicos (DNA, ácido dioxirribonucléico e RNA ácido ribonucléico). A molécula de DNA é conhecida como a molécula da hereditariedade, pois dentro dela estão contidas todas as informações genéticas das quais o novo indivíduo necessita para ser formado.

    Na molécula de DNA existem duas longas fitas de nucleotídeos que se enrolam formando uma estrutura de dupla hélice. Essa molécula se auto – reproduz e sintetiza o RNA que atua na síntese de proteínas. Cada nucleotídeo é composto por um açúcar, uma base e um fosfato, o açúcar é uma pentose do tipo desoxirribose no DNA e ribose no RNA. As bases são de 4 tipos A (adenina), C (citosina), T (timina), G (guanina) para o DNA. No RNA a base T (timina) é substituída pela base U (uracila). Para as duas fitas se ligarem e enrolarem formando uma dupla hélice, as bases se conectam através de ligações formando pontes de hidrogênio entre as bases complementares (A e T, G e C no caso do DNA e no caso do RNA A e U).

    Quando ocorre a duplicação do DNA uma enzima separa as duas fitas da hélice, e a informação contida no DNA é transferida para uma molécula de RNA, essa molécula é muito semelhante ao DNA, porém é constituída de um único filamento e sua função é reproduzir a seqüência de um dos filamentos do DNA, atuando como intermediário na construção de uma proteína. Cada uma das hélices do DNA serve como molde para a construção do novo DNA.

1. PRÁTICA I – Extração de DNA de Mucosa Bucal

2.1- Objetivo:

A aula prática teve como objetivo extrair DNA a partir de células da mucosa bucal.

2.2- Procedimento Experimental:

1. Material Necessário:

1 Copo descartável;

1 Espátula de madeira;

15ml de solução de sacarose a 3%;

1 tubo de ensaio;

Uma proveta para 15ml;

Etanol absoluto gelado;

Banho-maria à 60ºC;

Estantes para tubos de ensaio;

Caixa de isopor com gelo;

1 micropipeta de 500ml;

1ml de detergente neutro diluído a 25%;

NaCl (sal de cozinha);

Luvas descartáveis.

1. Procedimento:

Após ser feita a higienização da boca, raspamos delicadamente a mucosa bucal com a espátula de madeira. Colocamos 15ml de água com açúcar na boca e bochechamos por 60 segundos.

O volume obtido do bochecho foi recolhido no mesmo copo descartável, então mergulhamos a espátula usada na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho. Transferimos 5ml do obtido para um tubo de ensaio e adicionamos uma pitada de sal de cozinha. Após homogeneizar, adicionamos 500ml de detergente neutro diluído à 25% e homogeneizamos cuidadosamente.

Aquecemos o obtido a 60 ºC por 10 minutos e resfriamos por 5 minutos no gelo. Feito isso, adicionamos álcool gelado pelas bordas do tubo lentamente, até que alcançasse pelo menos 1cm de espessura. O DNA, insolúvel no álcool, ficou visível.

2.3- Resultados e Discussão:

Nesse experimento podemos observar o DNA após a adição do álcool gelado, pois o DNA é insolúvel em etanol, então as moléculas se juntam e ficam visíveis.

O resultado só foi possível graças ao sal que favoreceu a aglomeração das moléculas de DNA, e ao detergente que é responsável pela separação do conteúdo celular para que fique disperso na solução.

1. Respostas dos Questionamentos:

1.  Por que utilizamos água com açúcar na solução do bochecho?

Resposta: A água com açúcar foi utilizada no bochecho para melhor coletar as células da mucosa bucal.

1.  Por que é necessário usar o sal?

Resposta: Faz-se necessário usar o sal porque ele bloqueia a eletronegativade do fosfato-açúcar e favorece a aglomeração das moléculas de DNA.