Relatório Mononucleosis

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ

Centro de Ciências da Natureza

Departamento de Biologia

Profª Drª: Sandra Maria Mendes de Moura Dantas

Relatório de Teste de Micronúcleos

Iara Gabriele Lima Rameiro

Isabel Rodrigues Bento

Isabelle Nunes Oliveira de Barros

Tacyana de Carvalho Dias

Teresina

2018

MATERIAIS E MÉTODO

Materiais:

-Água destilada

-Centrífuga

-Escovas cervicais

-Eppendorf

-Estufa

-Fixador Etanol (80%)

-Fixador Metanol: ácido acético (3:1)

-Haste de plástico

-Lápis

-Microscópio

-Microondas

-Pêra

-Pipeta

-Solução salina de NaCl a 0,9%

-Suporte para Eppendorf

-Tubo de ensaio

Método:

1. Realizar 4 raspagens da mucosa oral, de cada participante, com escovas cervicais descartáveis. Observação: ao realizar a primeira raspagem da região é descartada com água destilada.

2. Reservar o coletado de cada indivíduo em 5 ml de solução salina.

3. Centrifugar o material em tubos de eppendorf durante 10 minutos em 1500 RPM e retirar o sobrenadante.

4. Adicionar solução salina e repetir a etapa 3 duas vezes.

5. Preparação das lâminas. Pré-aqueça as lâminas no microondas durante 1 minuto e meio, em seguida, aquecer na estufa (38ºC), por fim, identifique cada lâmina com o auxílio de um lápis.

6. Após realizar a etapa 4, retirar uma pequena quantidade de suspensão celular e colocar sobre as lâminas em forma de gotas.

7. Com a haste de plástico, espalhar o material sobre a lâmina.

8. Durante 1 hora, secar o material na estufa.

9. Posteriormente a secagem, aplicar o fixador metanol, retirado do congelador, durante 15 minutos.

10. Deixar as lâminas secarem a temperatura ambiente durante 12 horas.

11. Colocar as lâminas em água destilada por 1 minuto.

12. Coloração das lâminas. Aplicar (1) Giemsa (2% ou 10%) ou (2) Orceína acética (0.005%) por 7 minutos.

13. Lavar as lâminas duas vezes em água destilada.

14. Secar a temperatura ambiente.

15. Observar o material no microscópio. Observação: em microscopia óptica, com o aumento de 1000x, a frequência de micronúcleos e de anormalidades nucleares serão calculadas.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Na primeira parte da aula, realizada no laboratório de citogenética,