O Relatório de Bioquímica

1-INTRODUÇÃO

As proteínas além de serem o componente mais abundante, são as moléculas mais diversificadas quanto a forma e a função. As funções que desempenham são estruturais e dinâmicas e componentes do citoesqueleto e da estrutura de sustentação, como por exemplo, o colágeno, e participam de quase todos os processos biológicos (MARZZOCO.A; TORRES.B; 3Ed.2007). Existem muitas espécies diferentes de proteínas, cada uma especializada para uma função biológica diversa, como por exemplo, transporte de substâncias, manutenção da pressão defesa contra organismo estranhos. Além disso a maior parte da informação genética é expressa pelas proteínas e pertencem a classe dos peptídeos, pois são formadas por aminoácidos ligados entre si por ligação peptídicas, sendo esta uma ligação covalente entre grupo amino (-NH2) em um aminoácido com grupo carboxila (-COOH) de outro aminoácido através da outra formação de um amido. Os aminoácidos através de ligações amida-ácido formam-se macromoléculas linear que a partir de uma cadeia com tamanho de cem resíduos de aminoácidos são denominadas proteínas polipeptídios cada organismo possui milhares de diferentes proteínas com diferentes tarefas, a estrutura de algumas proteínas intra e extracelulares aumenta 15 milhões de vezes para dar a ideia da sua variedade (KOOLMAN.J; ROHN.K.H; 3Ed;2005) A organização especial da proteína é relutante do tipo aminoácidos que a compõem e de como eles estão dispostos uns em relação aos outros, aquecimento dos aminoácidos irá determinar o tipo de interação possível entre as cadeias laterais que como já exposto , apresentam caraterísticas de carga, volume e reatividade com a agua muito variáveis. A organização tridimensional de uma proteína, desde a sequência de aminoácidos passando pelo enrolamento da cadeia polipeptídica até a associação de várias cadeias, de salientar também que o dissulfeto é a interação hidrofóbicas e interação iônica, a desnaturação se dá não só peio calor mas também por extremo de pH e por alguns solventes orgânicos miscíveis com a água (álcool e acetona) por certos solutos como ureia e cloridrato de guanidinio ou por detergente, cada um desses desnaturantes representa um tratamento relativamente branco no sentido do que nenhuma ligação na cadeia polipeptídica é rompida, concluímos que proteínas são responsáveis pela forma e variedade das células e dos tecidos (VOET.D; VOET.J.G; PRATT.C.W; 3Ed.2006).

Objetivos

Analisar a precipitação da proteína ovoalbumina (clara de ovo) quando submetida à presença de sais, ácidos, solvente orgânico e alta temperatura.

Determinar o ponto isoelétrico da caseína.

2-MATERIAL E MÉTODOS

Quantidade	Descrição
50 mL	Clara de ovo 10%*
50 mL	Sulfato de amônio saturado**
20 mL	Caseína 0,5%*** ou Albumina
50 mL	Ácido clorídrico 0,05N
20 mL	Verde de bromocresol pka 4,7
20 mL	Etanol 95GL
20 mL	Ácido tricloroacético 10%
6	Tubos de ensaio
5	Pipetas de vidro graduada
2	Conta gotas
2	Bastões de vidro
1	Banho maria 100°C

* Preparo da solução de clara de ovo: 10 mL de clara + 100 mL de NaCl 1%.

** Preparo da solução saturada de (NH4)2SO4: 7,7g do sal 1m mL de água destilada.

*** Preparo da solução de caseína 0,5%: 0,5 g caseína em 100 mL de NaOH 0,05N.

 Procedimento 1: Precipitação de proteínas por adição de sulfato de amônia

1. Em um tubo de ensaio pipetar 1 ml de uma solução de clara de ovo 10 %
2. Adicionar 3 mL de sulfato de amônio saturado.
3. Observe o turvamento da solução.

Procedimento 2: Precipitação isoelétrico da caseína

1. Em um tubo de ensaio, pipetar 1 mL de solução de caseína 0,5%
2.  Adicionar HCl 0,05N gota a gota, agitando o tubo a cada adição do TCA até que a precipitação ocorra.

Para determinar grosseiramente o valor do ponto isoelétrico da caseina, adicionar gotas do indicador verde de bromocresol e comparar a cor do precipitado com a tabela de viragem abaixo:

Verde de bromocresol pKa = 4,7
pH	Faixa de pH	Cor do indicador
pH acido	Menor que 3,7	Amarelo
pH transição	3,7 a 5,7	Verde
pH alcalino	Maior que 5,7	Azul

        

Procedimento 3: Precipitação pelo calor

1. pipetar 1 mL da solução clara do ovo 10% em um tubo de ensaio.
2.  Aquecer em banho maria (100°C) por 5 minutos.
3. Observar o turvamento da solução devido à diminuição da solubilidade das proteínas da clara de ovo.

Procedimento 4: Precipitação por solvente orgânico

1. Pipetar 1 mL da solução de clara de ovo 10% no tubo de ensaio.
2.  Adicionar 1 mL de etanol 95 GL
3.  Observar o turvamento da solução devido à diminuição da solubilidade das proteínas da clara do ovo.

Procedimento 5: Precipitação por ácidos

1. pipetar 1 mL da solução clara de ovo 10% em um tubo de ensaio
2. adicionar 1 mL de ácido tricloroacético (TCA) 10%
3. Observar a formação de um precipitado branco

3-RESULTADO E DISCUSSAO

Procedimento 1: Precipitação de proteínas por adição de sulfato de amônia

Foi pipetado 1 ml da solução de clara de ovo 10% em um tubo de ensaio, em seguida foram adicionados 3 ml de sulfato de amônio saturado. Após o processo foi observado o turvamento da solução. O turvamento ocorreu devido a diminuição da solubilidade da albumina em função da competição com o sulfato de amônio pela água. A imagem a seguir mostra o resultado do experimento.