A Citometria de Fluxo

A CF é uma poderosa ferramenta que possibilita realizar a separação, contagem individual de células e detecção de biomarcadores proteicos. A partir de um feixe de laser incidente, é feita mediação da dispersão e da fluorescência do feixe de laser refletido pela da amostra celular. A dinâmica funcional é composta por 5 sistemas: fluido, óptico, eletrônico, de amplificação e computacional.

A citometria de fluxo permitiu identificar e caracterizar as propriedades físico-quimicas de células individuais dentro de populações homogêneas ou heterogêneas de micropartículas presentes em seres vivos.

A versão mais moderna é chama de FACS( separador celular ativado por fluorescência) faz a análise e diferenciação celular pelo emprego prévo de anticorpos fluorescentes, fornecendo informações rápidas e precisas com a identificação de inúmeras características intrínsecas ou extrínsecas contidas nas células, e reconhecer com precisão a granulosidade, o tamanho, por meio da leitura da intensidade da fluorescência refletida em células previamente marcadas com anticorpos monoclonais fluorescentes.

A FC é uma técnica baseada no emprego de laser óptico amplamente utilizado para triagem, contagem individual de células e detecção de biomarcadores e proteínas. Por meio de um feixe de laser, faz a medição da dispersão e da fluorescência do feixe de laser refletido a partir da amostra celular.

FCM ( citometria de fluxo multiparamétrica), realiza rápida identificação de células no instante que estas passam através de um aparelho de detecção eletrônica em uma corrente liquida, após a separação individual celular é feita a análise, contagem, e qualificação das micropartículas suspensas em fluxo, em meio liquido. Realiza com rapidez inúmeras características biológicas contidas nas células como: ácidos nucleicos, receptores de superfície, epítopos de proteínas, a síntese de proteínas, citocinas, e concentração de ions, ao mesmo tempo dentro de uma célula única. VANTAGEM: capacidade para medição simultaneamente de vários parâmetros.

Citometria de massa, a células também são marcadas com anticorpos conjugados. Diferente da FC onde os anticorpos são conjugados a fluorocromos, na citometria de massa são conjugados a isótopos de metais raros, que são detectados por um espectrofotômetro de massa, conjugado ao citômetro. VANTAGEM: a capacidade multiparametrica é maio que a FC. DESVANTAGENS: células são destruídas durante a análise, impedindo o isolamento para utilização em outros experimentos.

PRINCIPIOS BÁSICOS

O processo se inicia com a seleção de anticorpos, marcados com fluorocromos e específicos para o antígeno celular que permite caracterizar a população das células de interesse.