Determinação de Triglicérides

CENTRO UNIVERSITÁRIO DO PLANALTO CENTRAL PROFESSOR APPARECIDO DOS SANTOS

 

 

 

 

Curso: Farmácia

Turno: Noturno

Período: 4°

Disciplina: Bioquímica Farmacêutica

2° semestre de 2018

Professora: Flávia Caixeta  

 

 

 

 

 

 

Aula Prática n° 05 Determinação de Triglicérides 

 

         

         

 [pic 2][pic 3]

        Welton Soares         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

         

 

 

 

 

 

 

 

Gama, 06/11/18

 

 

1. Introdução Os triglicerídeos fazem parte da composição de lipídeos no plasma, assim também como os ésteres do colesteril, o colesterol, os ácidos graxos e os fosfolipídios. Estes são substâncias insolúveis em água e são divididos em quilomícrons, lipoproteínas do tipo VLDL, IDL, LDL e HDL, conforme sua densidade e transportados em forma de lipoproteínas (SCHIAVO et al., 2003). Os triglicerídeos são encontrados no organismo vivo e por processos de extração e armazenagem. São gorduras e óleos compostos por ésteres de ácidos graxos e glicerina. Sua principal função é fornecer energia para as células. A enzima lipase lipoproteica, fazem com que os triglicerídeos e o colesterol, que entram no plasma como partículas quilomícrons e VLDL sofram mudanças intravasculares, assim os triglicerídeos e diglicerídeos sofrem hidrólise e são convertidos em ácidos graxos e monoglicerídeos (SCHIAVO et al., 2003). Quando o sangue passa pelos capilares dos tecidos adiposo e no fígado, a maior parte desses quilomícrons é removida, pois, contem quantidade significativa de enzima lipase, que é a responsável por hidrolisar esses triglicerídeos para liberação destes ácidos graxos e glicerol. Essa é a primeira etapa de utilização de triglicerídeos como fonte de energia para o organismo. Além dos triglicerídeos, a lipase também hidrolisa os fosfolipídeo (GUYTON e HALL, 2011). O glicerol é modificado pelas enzimas glicerol 3-fosfato, que também é utilizado como fonte de energia após metabolização da glicose na via glicolítica. Durante a degradação da glicose pela via glicolítica, ocorre a síntese dos triglicerídeos e a conversão dos carboidratos em acetil-coA. Quando há no organismo quantidades de carboidratos em excesso, os triglicerídeos utiliza como fonte de energia. Deste modo, o que fornece a porção glicerol dos triglicerídeos é o alfa-glicerofosfato, que em excesso se liga aos ácidos graxos livres como triglicerídeos armazenados (GUYTON e HALL, 2011). As concentrações elevadas de triglicerídeos no soro podem ser devido a alterações hepatobiliares, diabetes mellitus, hipotireoidismo, alcoolismo e hiperlipoproteinemia familiar. Existe a necessidade de baixar os níveis de triglicerídeos no plasma, diminuindo o risco de doenças cardiovasculares, que neste caso, está mais associado as mulheres do que aos homens. Para isso é necessário ajustar os valores de HDL-colesterol e de outros fatores. O aumento excessivo dos níveis de colesterol no organismo, causa outra patologia nomeada de hipercolesterolemia, que é de fácil controle por meio de dieta e atividade física, porém, precisa ser tratada já que o aumento do colesterol total e LDL e diminuição no HDL estão juntos a esse distúrbio lipídico. (GUYTON e HALL, 2011).   Objetivo Utilizar um sistema para determinação enzimática dos triglicérides no soro.   Materiais e Métodos • Materiais Descrição do item Reagentes  Tampão: Piperasine-N,N’-bis (2-etanosulfônico ácido) (PIPES) 50mmol/litro e pH 7,4, contendo ainda 1,25 mmol de 4-clorofenol. Enzimas: cada frasco contém Lipase, Glicerolquinase, Glicerolfosfato Oxidase, Peroxidase, ATP e 4-Aminoantipirina. Solução padrão 200 mg / dL. Água destilada. Vidrarias e equipamentos
	Tubos de ensaio
Estante
Micropipetas 20 µL
Pipeta Graduada
Ponteiras Descartáveis
Pêra
Banho-Maria a 37°C
Espectrofotômetro

Amostra

Sangue com anticoagulante (EDTA a 10%).

 

• Procedimentos

Parte I – Preparo da amostra 

1. Coletou-se o sangue com anticoagulante (EDTA a 10%).
2. Centrifugou-se e separou-se o soro.

 

Parte II – Preparo do reagente de uso: 

1. Transferiu-se parte da solução de um frasco tampão (7mL) para um frasco enzimas.
2. Dissolveu-se por inversão e retransferiu-se para o frasco tampão.  
3. Homogeneizou-se por inversão.  

 

Parte III – Dosagem no soro 

1. Identificou-se 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padrão).
2. Ao tubo B, adicionou-se 2,0 mL de reagente de cor.
3. Ao tubo T, adicionou-se 2,0 mL de reagente de cor e 20 µL de amostra.
4. Ao tubo P, adicionou-se se 2,0 mL de reagente de cor e 20 µL da solução padrão.
5. Misturou-se por agitação e incubou-se por 10 minutos, em banho-maria, a 37°C. Retirou-se do banho-maria e leu-se as absorbâncias de teste e padrão, em espectrofotômetro, em 510 nm, zerando o aparelho com o branco.  

 [pic 4][pic 5]

4. Resultados e Cálculos

 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒

Triglicérides (mg/dL) = [pic 6] x 200

𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑑𝑟ã𝑜

 

Triglicérides (mg/dL) = [pic 7] x 200

 

Triglicérides (mg/dL) = 68

 

 

5. Discussão e Interpretação dos Resultados

Os triglicérides são hidrolisados pela lipase lipoprotéica e o glicerol liberado é fosforilado pela glicerolquinase formando glicerolfosfato que é oxidado a dihidroxiacetona e água oxigenada por ação da glicerol-3-fosfato oxidase. Através da reação catalisada pela peroxidase, a água oxigenada reage com a 4-aminoantipirina (4-AMP) e 4-clorofenol, produzindo a quinoneimina (vermelha) cuja absorbância, medida em 510 nm, é diretamente proporcional à concentração de triglicérides.

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