O Relatório de Bioquímica

FACULDADE PARANAENSE - FAPAR

CURSO: FARMÁCIA

DISCIPLINA: BIOQUÍMICA METABÓLICA

CHRISTIANO ANTONIO DA COSTA NASCIMENTO

DIEGO FERNANDO BUENO DOS REIS

SILVIO CESAR COLERA DA SILVA

MARLENE DO ROCIO ZIOMEK

VALDETE CLARA DE SOUZA YAMASHITA

                           

Relatório: Práticas de bioquímica laboratorial

CURITIBA

2021

1. INTRODUÇÃO

Os triglicérides são o resultado final da esterificação de ácidos graxos com o glicerol. São formados pela fração lipídica do plasma ao lado do colesterol e fosfolipídios. Podem ser categorizados de acordo com sua imagem, como endógeno (que são absorvidos pelo próprio organismo) ou exógeno (provenientes da alimentação), este último representa aproximadamente 80% dos quilomícrons circulantes no sangue.

A determinação dos triglicérides tem um amplo significado clínico, principalmente no que se refere a doenças coronarianas e ateroscleróticas. O método mais utilizado para a determinação dos triglicérides é o teste enzimático e colorimétrico para o doseamento de triglicérides no soro ou plasma usando reagente líquido pronto para uso. (LABORCLIN, 2004).

Outra análise realizada em laboratório foi a de ureia, que é o principal produto do catabolismo das proteínas, tem sua concentração sérica afetada pela dieta e pelo estado de hidratação, constituindo uma indicação grosseira do estado da função renal.

A ureia viaja pela corrente sanguínea até os rins, onde será filtrada e eliminada na urina. Quando os rins não estão funcionando bem, a filtragem de ureia é comprometida. Isso quer dizer que boa parte da ureia produzida não será excretada na urina, permanecendo no sangue. Dessa forma, o exame de ureia avalia as quantidades da substância no sangue a fim de investigar possíveis doenças renais. (SERPEJANTE, 2015).

Como citadas anteriormente, essas são as duas análises realizadas em laboratório na mesma noite, onde o sistema de desenvolvimento e utilização de equipamentos é semelhante, juntamente com o auxílio do espectrofotômetro, para realização da leitura dos resultados obtidos.

1.  METODOLOGIA E DESENVOLVIMENTO

Os procedimentos adotados foram:

Experimento 1: O teste se baseia no princípio de que os triglicérides são hidrolisados pela lipase lipoprotéica e o glicerol liberado é fosforilado pela glicerolquinase formando glicerol -3- fosfato, que é oxidado a dihidroxiacetona e água oxigenada por ação da glicerol-3-fosfato oxidase. Através da reação catalisadora da peroxidase, a água oxigenada reage com a 4-aminoantipirina (4-AMP) e 4-clorofenol, produzindo a quinoneimina, cuja absorbância, determinada pelo espectrofotômetro, sob o comprimento de onda em 500 nm, é diretamente proporcional à concentração de triglicérides. (LANTINI,2011; VALDEZ et.al,2012).

Experimento 2: A ureia é hidrolisada pela uréase com íons amônia e CO2. Em meio alcalino, os íons amônia reagem com o salicilato e hipoclorito de sódio, sob a ação catalisadora do nitroprussiato de sódio, para formar indofenol.

A absorbância do complexo azul formado, medida em 600 nm, é diretamente proporcional à concentração de ureia na amostra analisada. (CAMPAGNOLI, 2017)

Procedimento do teste:

1. Identificar 3 tubos de ensaio: “Branco”, “Teste” e “Padrão” e proceder:

TUBOS	BRANCO	TESTE	PADRÃO
Amostra	-	10 μL	-
Padrão	-	-	10 μL
Urease Tamponada	1 ml	1 ml	1 ml

1. Homogeneizar e agitando lentamente os tubos por alguns segundos e incubar por 5 minutos a 37ºC em banho maria.
2. Adicionar aos tubos 1 ml de oxidante de uso.
3. Homogeneizar e incubar os tubos novamente por 5 minutos a 37ºC.
4. Fazer as leituras fotométricas de Padrão (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 600nm.

1. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Resultado do experimento 1:

A absorbância é medida pela técnica de espectrofotômetro ultravioleta para determinar a concentração de compostos presentes em solução. O princípio deste método reside na detecção de compostos corados (cromóforo) obtidos pela reação entre o composto a ser analisado e o reagente, originando um produto colorido. (MENDES, [S.D.]).

O espectrofotômetro emite um feixe colorido monocromática que atravessa a solução com moléculas absorventes, onde parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido. A absorção de luz depende da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução.

Além das amostras – teste, também são analisados no espectrofotômetro uma amostra chamada branco, que contém apenas o reagente, e uma amostra padrão que é utilizada para corrigir o zero, contendo o reagente um volume de triglicérides de concentração conhecida. (BIOCLIN, 2014).

A concentração de triglicérides na amostra analisada pode ser calculada da seguinte forma:

TRIGLICERIDES EM MG/DL= ABSORBÂNCIA DO TESTE / ABSORBÂNCIA DO PADRÃO X 200

As concentrações obtidas através desses cálculos, são comparadas com valores de referência para o presente método, que foram obtidos através da determinação de triglicérides em populações sadias de diferentes idades.

IDADE	DESEJÁVEL	AUMENTADO
< 10 ANOS	< 100 MG/DL	> 100 MG/DL
DE 10 A 19 ANOS	< 130 MG/DL	> 130 MG/DL
ADULTOS > 20 ANOS	< 200 MG/DL	> 200 MG/DL

Segue abaixo os valores obtidos quando confrontados no equipamento:

Branco: 0

Teste: 0,077

Padrão: 0,193

TAG: AT / AP X 200

0,077 / 0,193 X 200= 79,79 MG/DL.

Considerando os valores mínimos de referência para o resultado obtido, conclui-se que ocorreu algum erro de procedimento. A professora argumentou em sala que a amostra de sangue utilizada pode ter sofrido degradação pelo tempo de exposição.

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