RELATÓRIO DE ANÁLISES TOXICOLÓGICAS

RELATÓRIO DE ANÁLISES TOXICOLÓGICAS

Caroline Rosa Pereira                                                 Farmácia, Turma 2

Thaís Prado de Oliveira

Maria Thereza Homem

Determinação de Ácido delta-aminolevulínico

                                                                                     

1. Introdução

O chumbo foi um dos primeiros metais que o homem aprendeu a usar. Por ser utilizado de forma tão intensiva e por tão longo tempo, a história de sua intoxicação é extensa. Os casos atuais de intoxicação são em geral, mais brandos do que os de 50 anos atrás. Os casos de toxicidade resultam tanto da exposição ambiental quanto da industrial. É considerado uma doença crônica, às vezes com episódios sintomáticos agudos que levam ao efeito crônico irreversível. Seus compostos inorgânicos apresentam duas vias de absorção: 1. Respiratória: importante via na exposição ocupacional. 2. Digestiva: rota predominante. Após a absorção, é distribuído pelo sangue, inicialmente nos tecidos moles, principalmente no epitélio tubular dos rins e fígado, onde parte é excretada na bile, outra é armazenada e uma terceira penetra na circulação na forma de fosfato de chumbo. Com o tempo, é redistribuído e depositado nos ossos (95%), dentes e cabelo, provavelmente por seguir as rotas metabólicas do cálcio.

1. Finalidade da Análise

O chumbo detém grande afinidade por radicais sulfidrila, o que lhe confere capacidade de interferir com grande número de sistemas enzimáticos. Um dos seus efeitos mais estudados é a capacidade de interferir com a biossíntese do heme, particularmente inibindo as atividades da ALA-D e da ferroquelatase. A ferroquelatase é uma enzima mitocondrial que se incumbe da parte final da formação do heme, que é a incorporação do ferro a protoporfirina IX. Por sua vez, a ALA-D é uma enzima citoplasmática da biossíntese, que é a formação do porfobilinogênio a partir de duas moléculas de ácido delta-aminolevulinico. Da inibição da ALA-D  é inversamente proporcional a concentração de chumbo no sangue a partir de 10 ug/dL, embora, aparentemente, não haja uma concentração limiar de chumbo para a inibição da enzima.  A determinação da atividade da ALA-D permite a verificação de efeito associado ao chumbo em níveis de exposição inferiores aos limites para o indicador biológico da exposição ocupacional, e, dos efeitos mensuráveis para o chumbo, representa o de maior especificidade e maior sensibilidade.

A técnica fundamenta-se em determinar a concentração ácido delta-aminolevulínico (ALA) na urina, pois este é um biomarcador de exposição ao chumbo e o mais aceito para avaliar exposições biológicas ao metal.

1. Fundamento da técnica

A alteração bioquímica produzida pelo chumbo, ou seja, a inibição da ALA-D pode ser quantificada através da condensação do ALA com uma molécula de acetoacetato de etila formando um complexo ALA-pirrol. Esse complexo é extraído com acetato de etila e colocado para reagir com Reativo Ehrlich (p-dimetilaminobenzaldeído) formando um complexo de coloração rosa chamado ALA-pirrol-PABA, em seguida, quantificado por espectrofotometria visível no comprimento de onda de 553 nm.

1. Procedimento

4.1 Amostra

[pic 1]

     Amostra de urina 3°

   (tubo A3)[pic 2][pic 3]

       [pic 4]                                                              [pic 5]

      A3 I                                                          REF I

1mL de urina do tubo A3                         1mL de urina do tubo A3

+ 1mL de tampão acetato                      + 1mL de tampão acetato

[pic 6][pic 7]

Adicionar 200µL (0,2mL)                           Banho fervente por 10 min

 Acetoacetato de etila

[pic 8][pic 9]

       Agitar por 5s

[pic 10]

Formação do Complexo

ALA-pirrol[pic 11]

Banho fervente por 10 min

[pic 12]

Esfriar com água da torneira

[pic 13]

Adicionar 3mL Acetato de etila

[pic 14]

Centrifugar por 3 min para

separação da fase orgânica[pic 15]

Retirar 2mL da fase orgânica

(superior) e transferir para outros

dois tubos A3 II e REF II

[pic 16][pic 17]

 [pic 18]                                            [pic 19]

                          A3 II                                       REF II                

[pic 20]                                       [pic 21]

                         A3 II                                REF II

[pic 22][pic 23]

                Adicionar 2mL do                   Adicionar 2mL do

                   Reagente Ehrlich                   Reagente Ehrlich[pic 24][pic 25]

                   Aguardar 10 min                     Aguardar 10 min[pic 26][pic 27]

              Transferir para Cubeta            Transferir para Cubeta

                             de vidro                                  de vidro[pic 28][pic 29]

  Realizar leitura  ƛ=553 nm          Zerar (espectrofotômetro)[pic 30][pic 31]