Relatório Microbiologia

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Centro Universitário Estácio de Sá de Santa Catarina

Curso de Farmácia – Turma: 3001 (Farm. Not. B)

Professora: Ana Paula Dores Ramos

Aline Fernanda Magalhães de Oliveira

Juliane Steinbach da Silva

Microbiologia Básica

Relatório de Aulas Práticas

Microbiota Normal

São José

2016

1. Introdução

         A Microbiota normal é composta das bactérias presentes no nosso corpo de forma benigna, porém, caso ocorra de migrar para outra parte do corpo pode acarretar problemas a saúde do indivíduo. Ela se desenvolve durante toda a vida humana, gerando comunidades bacterianas estáveis.

Em todo o corpo há gêneros bacterianos específicos para cada área em cada momento da vida, dependendo de seu ph, água, oxigenação, temperatura, nutrientes e outros fatores do sistema imunológico. Elas são importantes no momento da doença e defesa do corpo.

A técnica de coloração de Gram divide as células em dois grupos por meio de cores, as gram positivas são aquelas que têm uma camada espessa de peptidoglicano e não tem a membrana externa, por isso ao fim do processo apresenta a cor roxa, já as gram negativas têm a camada de peptidoglicano fina e uma membrana externa que são destruídas no processo da coloração e no fim da técnica apresenta a cor vermelha.

Criada por Hans Christian Gram, a técnica consiste no uso de quatro soluções, primeiro é posto em cima da lâmina com as bactérias o cristal violeta por um minuto e depois enxaguado com água destilada, ele cora o peptidoglicano em roxo, o mesmo é feito com o lugol, que se liga ao cristal violeta formando um complexo maior roxo, o álcool-acetona é deixado por cinco segundos, ele destrói a membrana externa, retirando a cor das bactérias gram negativa e, por último é colocada a fucsina, por trinta a sessenta segundos que cora o citoplasma da célula em vermelho, diferenciando assim as bactérias gram positivas e as gram negativas.

2. Objetivo

  Utilizar a técnica de gram para diferenciação de bactérias do tipo gram positivas e do tipo gram negativas. Colher, isolar, distinguir bactérias de amostras da microbiota normal em meios líquidos e sólidos, confeccionando uma lâmina.

3. Material e Métodos

3.1 Cultivos das Bactérias

3.11 Materiais Necessários:

Palitos de dente esterilizados

“Swabs” estéreis

Alça bacteriológica

Tubos com caldo BHI (Brain Heart Infusion)

Placas de Petri com Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB), e Ágar PCA

Bico de Bunsen

Estufa bacteriológica A 37° C.

3.12 Métodos:

1. Identificar todo o material a ser utilizado.

2. Assepticamente abrir o tubo onde se encontram os palitos estéreis, servir-se de um palito.

3. Coletar o material passando o palito abaixo das unhas (com cuidado para não lastimar o tecido). Introduzir o palito no tubo com caldo nutriente (BHI). Incubar por 18-24hs em estufa a 37°C.

4. Assepticamente abrir o “swab”.

5. Umedecer o “swab” na água destilada estéril. Coletar material da nasofaringe e inocular no caldo BHI. Incubar por 18-24hs em estufa a 37°C.

6. Assepticamente abrir o “swab”.

7. Coletar material da orofaringe e semear por estrias descontínuas, (com a alça bacteriológica), no Ágar PCA. Incubar por 18-24hs em estufa a 37°C.

Após o período de incubação:  

             1. Identificar todo o material que vai ser utilizado.

2. Com a cultura mista da região sub-ungueal, proceder à semeadura por estrias descontínuas em uma placa com Ágar EMB. Identificar e incubar.

3. Com a cultura mista proveniente da amostra da nasofaringe, carregar uma alçada e inocular por estrias descontínuas em placas com Ágar PCA.

4. Da placa com colônias provenientes da amostra de orofaringe, eleger uma delas, caracterizá-la macroscopicamente e realizar esfregaço e coloração de Gram e observá-las ao microscópio.

3.2 Esfregaço

3.21 Materiais Necessários

Placa de Petri com bactérias cultivadas

Alça bacteriológica

Lâmina estéril

Tubo com água destilada estéril

Bico de Bunsen

1.  Métodos:

1. Etiquete a lâmina para saber o lado do esfregaço.

2. Com a alça bacteriológica flambada e resfriada, coloque uma pequena gota de água destilada no meio da lâmina, sempre por perto da chama.

3. Escolha uma colônia e pegue bactérias com a alça bacteriológica, de leve, de pequenas batidinhas com a alça na gota de água destilada, sem tirar a alça da lâmina, faça círculos de dentro para fora para espalhar as bactérias da colônia escolhida, obtendo um esfregaço de forma oval, uniforme e fino.

4. Balance a lâmina perto do bico de Bunsen para secar.

5. Passe a lâmina três vezes (três idas e três voltas) pelo fogo para fixar o material na lâmina.

3.3 Colorações de Gram

3.31 Materiais Necessários: