Técnicas Citoquímicas e Imunocitoquímica

[pic 1]

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE- CCBS        

CURSO DE BIOMEDICINA

Técnicas Citoquímicas e Imunocitoquímica

Belém - PA

Setembro/2015

[pic 2]

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE- CCBS        

CURSO DE BIOMEDICINA

ELOY RAUL DA COSTA RODRIGUES

Título do trabalho, apresentada à disciplina Citologia e Embriologia, ministrada pela Professora Valéria de Albuquerque Oliveira.   Curso de Biomedicina da UNAMA.

Belém - PA

Setembro/2015

Citoquímica:

Diagnóstico raro de mieloma mielomonocítico

Objetivo:

Apresentar o raro diagnóstico da associação do mieloma múltiplo com a leucemia mielomonocítica aguda e demonstrar a importância da imunofenotipagem por citometria de fluxo na confirmação deste diagnóstico.

Materiais e Métodos:

Nos dois casos, o material de análise foi aspirado de medula óssea obtido conforme técnicas recomendadas. Foram realizadas análises morfológicas em lâminas coradas pelo método pancromático de Romanovsky.

As citoquímicas realizadas foram peroxidase (método de Washburn), sudan black (método de Sheehan e Storey), PAS (método de Tomasi), oil red (método de Lillie) e alfa-naftil acetato esterase (método de Yam et al.).

Resultados:

O caso 1 de mieloma mielomonocítico foi diagnosticado pela análise morfológica do aspirado de medula óssea, onde foram encontrados 90% de células volumosas, pleomórficas, com citoplasma basofílico intenso, sem grânulos, núcleo com cromatina pouco densa e um ou mais nucléolos evidentes. Não foram encontrados bastonetes de Auer (Figuras 1a e 1b).

A peroxidasse, o sudan black, o PAS e o oil red (Figura 2) foram negativos nas células blásticas, sendo que a alfanaftil acetato esterase apresentou-se positiva nestas células.

                                                        Figura 1a – Morfologia: caso 1

[pic 3][pic 4]

Figura 1b – Morfologia: caso 1

Conclusão:

O exame de imunofenotipagem por citometria de fluxo é uma técnica complementar à análise morfológica e citoquímica que possibilita a realização do raro diagnóstico de mieloma mielomonocítico. A investigação de doença residual mínima pela presença das aberrações fenotípicas e citogenéticas é possível por estas metodologias.

Referencia:

Advani, S.H. et al. Therapy-related leukemia: a report of five patients and a review of literature. Oncology, 40(4): 268-72, 1983.

Espessura da parede celular de Rhodotorula

rubra expostos ao calor e stress osmótico

Objetivo:

Vários estudos foram realizados com R. Rubra para determinar o efeito da concentração de sólidos solúveis na resistência ao calor. Estes estudos mostraram que a R. rubra resiste ao processo de pasteurização baixas concentrações de 12, 20, 30, 36, 38, 40, 42, 52, 56, 58 e 62 (1.2.3.4)°, Brix concluindo que a resistência ao calor do R. rubra aumenta a concentração de sólidos solúveis. Embora o mecanismo pelo qual a elevada concentração de açúcar proporcionam proteção contra o calor em levedura é desconhecida, tem sido sugerido que o aumento de resistência é devido à desidratação passiva de protoplasma celular e lípidos tem um efeito de proteção porque a alterações nos lípidos e, ou proteínas na parede celular. A finalidade deste estudo consiste em analisar, sob microscópio electrónico de transmissão, a espessura da parede da parede celular de R. rubra aumentou em 52° Brix, tanto antes como depois do tratamento térmico em comparação com um controlo não tratado 12° Brix.

Materiais e métodos

Preparação da estirpe comum de R. rubra.

Um volume de 30 ml de sumo de laranja (Citrus sinensis) limpas, laranjas maduras foi esterilizado em autoclave durante 15 minutos a 105 ° C. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, inoculou-se uma ansa cheia de cultura durante 48h R. rubra e incubadas durante 48-72 horas até não haver mais 40-60 células por campo (40X) na cultura.

Preparação de Amostras de suco de laranja.

A percentagem de sólidos em um volume de 50 ml de sumo de laranja foi ajustada pela adição de sacarose, glicose e frutose numa razão de 2: 1: 1, até atingir um valor total de 12% de açúcar e 52%. As concentrações de sólidos solúveis foram determinadas com um refratômetro Modelo Carl Zeiss 130486, que produziu leituras diretas as percentagens de sólidos solúveis (Brix), calculado com um fator particular de acordo com a temperatura de análise. Três amostras de sumo de laranja (A: 12° Brix, B:° Brix 52 e C: 52° Brix) foram esterilizadas em autoclave a 105°C durante 15 minutos, após a esterilização, as amostras foram arrefecidas até à temperatura ambiente, inoculou com uma solução de cultura de estoque A. rubra. E incubada a 28°C durante 48-72h. As amostras A e B foram diluídos a partir de 10-1 a 10-5 com água peptonizado. Cada diluição foi semeada com placas de agar de malte 2 e incubadas a 28°C durante 48-72h.

Teste de resistência ao calor.

Amostra C, a cultura a 52° Brix / 48-72 h (a partir da parte anterior) foi sujeita a stress térmico a 67°C durante 15 segundos. A amostra C foi diluído a partir de 10-1 a 105 com água peptonizado. Cada diluição foi semeada em placas de agar de malte 2 e incubadas a 28°C durante 48-72h.

Preparação de amostras para microscopia eletrônica.

Imediatamente após a incubação, foram tomadas três a quatro colónias para cada concentração do sólido solúvel a ser estudada, 12° Brix, 52° Brix e 52° Brix de stress de calor. Fixação primária foi de 4% glutaraldeído por 10-12h. Após a fixação, estes foram lavados três vezes durante 10 min com 0,1 M de cacodilato de solução de pH 7,4; por carga, eles foram ressuspensas novamente tetróxido de ósmio a 1% durante 2h, como ligante secundário. Eles foram, em seguida, lavou-se com 0,1M, pH 7,4% de tampão de tampão / solução de cacodilato de pH 7,4 durante 10 minutos e centrifugou-se a 5000 RPM durante 15 minutos fixa.