UM RELATÓRIO DE HISTOLOGIA

Relatório de aula prática

Espectrofotometria

Objetivos:

• Perceber o funcionamento do espectrofotômetro;
• Observar a propriedade e a curva padrão (calibração);
• Construir o gráfico da curva padrão (calibração);
• Familiarização com a lei de Beer-Lambert e as relações de transmitância e absorbância.

Princípio do teste:

O reagente do biureto, uma solução de Sulfato de Cobre, Citrato trissódico, Carbonato de Sódio e Hidróxido de Sódio, reage com as proteínas da amostra, formando um complexo corado de cor violeta, que é proporcional à concentração proteica da amostra.

Materiais:

• 1 Espectrofotômetro
• Micropipetas
• Pipetas sorológicas graduadas ( 5 ml e 2 ml)
• Estante com tubos de ensaio
• Peras três vias
• Ponteiras ( 1)
• Reagente proteína totais

Procedimento:

Foi realizado, o método do biureto para a determinação de proteínas totais no soro.

REAGENTES:

Soro padrão de proteínas totais ( 2 gotas)

Reagente do biureto:

Hidróxido de sódio a 10%:

 NAOH ...............................................10g

 H2O destilada q.s.p. .........................100 mL

Armazenar em frasco de polietileno.

Reagente cromogênico (biureto):

 H20 destilada...................................50 mL

Sulfato cúprico x 5H2O....................150 mg

Tartarato de Na e K..........................600 mg

NaOH a 10%.....................................30 mL

H2O destilada q.s.p. ....................... 100 mL

Soro de concentração desconhecida de proteína (amostra).

Resultados:

Toda reta r do plano cartesiano pode ser expressa por uma equação do tipo:

[pic 2]

Assim teremos a curva de calibração.

Demostrando o teste foi obtido esta tabela, e a curva de calibração que se encontra em anexo ( Anexo I).

Padrão	Absorvância
1	0,000
2	0,491

A curva de calibração é a representação gráfica da relação entre os valores das absorvâncias com os valores das concentrações de um conjunto de soluções padrão.

[pic 3]

Padrão: 0,00                                        Teste:0,491

[pic 4]

[pic 5]

Discussão:

A curva de calibração demonstra a linearidade da reação até uma determinada concentração, na qual pode ser determinado um fator t de calibração (F), de acordo com a Lei de Beer. As curvas de calibração são utilizadas para substituir os cálculos matemáticos na determinação das concentrações das amostras.

De acordo com os dados acima e os resultados obtidos, é possível observar que o valor assumido pela absorbância cresce com a concentração das soluções, como descreve a lei de Lambert-Beer, uma vez que o aumento da concentração resulta no aumento do número de partículas que interagem com a radiação.