DETECÇÃO DE SALMONELLA

DETECÇÃO DE SALMONELLA

A técnica tem a finalidade de garantir a detecção mesmo em situação extremamente desfavoráveis, e possui quatro etapas.

Pré-enriquecimento em caldo não seletivo: visa recuperação de células injuriadas (caldo lactosado).

Enriquecimento seletivo: para inibir a multiplicação do microbiota e acpmpanhante e promover o aumento do número de células de Salmonella. (TT caldo tetrationato, e SC caldo seleneto cistina).

Plaqueamento seletivo diferencial: promover o desenvolvimento preferencial de colônias de Salmonella. (VB – ágar; SS – salmonela-shegli, XLB – ágar xilose lisina desoxicolato).

Confirmação para vereficar suas colônias típicas são de Salmonella (TSI – ágar tríplice açúcar ferro, LIA – ágar lisina ferro).

PROVAS BIOQUÍMICAS

TUBO 1: TRI (triptofano)

               GLI (glicose)

               GÁS ( gás a partir da GLI)

               H2S (ácido sulfídrico)

               Uréia (hidrolise de areia)

TUBO 2: descarboxilação da lisina

TUBO 3: descarboxilação ornetina

               Motilidade

                Endol

TUBO 4: RHA – rhamnose

TUBO 5: citrato

ETAPAS DA PRÁTICA

Primeiro etapa: caldo lactosado (pré-enriquecimento)

- 225g de caldo lactosado

- incubação 35ºC de 18h à 20h

Segunda etapa: preparação TT e SC

- inocular nos TT e SC

- enriquecimento seletivo

- 1mL da solução da primeira etapa

- 10mL TT  ou 10mL SC

- incubação 35ªC por 24h

Terceira etapa: VB, SS, XLD

- meios de cultura sólidos

- estriar na placa

- TT em 3 meios

- SC em 3 meios

- dividindo as 3 placas em duas partes

Quarta etapa: TSI, LIA

- 7 tubos de cada

- provas bioquímicas

- tubos de ensaios deitados para aumentar a superfície de contato

[pic 1]

RELATÓRIO DIÁRIO DA PRÁTICA

Primeiro dia:

- preparação do caldo lactosado deixando incubado por até 20h na estufa

Segundo dia:

- inocular a amostra no caldo lactosado e fazer os meios TT e SC para ser usado no segundo dia.

- amostra era massa de pão de queijo, 23,5g

- deixar as inoculações por 24h na estufa à 35ºC para verificação no terceiro dia.

- Para meio TT e SC água esterilizada, 10mL de cada

- 1,4% de iodo no TT, após estar resfriado

- ferver por 10 minutos em banho maria, quando resfriar colocar 10mL em todos os 7 tubos.