A CROMATINA SEXUAL

[pic 1]FACULDADE DE TECNOLOGIA DE TERESINA - CET

MARIA JOELMA DE SOUSA LEAL

OBTENÇÃO DE PREPARAÇÕES CROMOSSÔMICAS MITÓTICAS DE ROEDOR E ANÁLISE DE METÁFASES MITÓTICAS COM COLORAÇÃO CONVENCIONAL.

TERESINA - PI

 2013

MARIA JOELMA DE SOUSA LEAL

OBTENÇÃO DE PREPARAÇÕES CROMOSSÔMICAS MITÓTICAS DE ROEDOR E ANÁLISE DE METÁFASES MITÓTICAS COM COLORAÇÃO CONVENCIONAL.

Relatório apresentado ao curso de Graduação em Biomedicina da Faculdade de Tecnologia de Teresina – CET, como requisito para  aprovação na disciplina de citogenética.

Orientador: Profª Débora Cássia Vieira Gomes.

TERESINA - PI

 2013

SUMÁRIO      

1 Introdução------------------------------------------------------------------------------------------------3

2 Objetivos--------------------------------------------------------------------------------------------------3

3 Procedimento Experimental----------------------------------------------------------------------------4

4 Resultados------------------------------------------------------------------------------------------------6

5 Discussão-------------------------------------------------------------------------------------------------8

6 Conclusão-----------------------------------------------------------------------------------------------9

7 Referências----------------------------------------------------------------------------------------------10

                                                                       

                                                                                                                                                     3

1-INTRODUÇÃO

O início da citogenética humana é geralmente atribuído a Walther Flemming, um citogista e professor de anatomia austríaco que, em 1882, publicou as primeiras ilustrações dos cromossomos humanos. Flemming também se referiu à porção corável do núcleo como cromatina, além de ter sido o primeiro a utilizar o termo mitose. Em 1888, Waldeyer introduzio a palavra comossomo, a partir das palavras gregas pra “corpo colorido”, e vários cientistas proeminentes da época começaram a formular a idéia de que os determinantes da hereditariedade são trasportados pelos cromossomos(MALUF, 2011).

Em 1955, Forde e Hamerton trabalharam um método de pré-tratamento das células cultividas com Colchicina, de forma a bloquear o fuso mitóticoe, e assim, acumular células em metáfase(Imagem 01)( MALUF, 2011).

[pic 2]

Imagem 01- Células em metáfase, obtida com uso

de colchicina.

 

O uso de uma solução hipotônica tem como função provocar a entumescência das células através de um fenômeno osmótico, permitindo no final uma boa dispersão dos cromossomas. As soluções usadas devem possuir uma baixa pressão osmótica e podem ser várias: o citrato de sódio, o cloreto de sódio hipotônico, o cloreto de potássio, o glicerofosfato de potássio e a água bi/tridestilada(SHARMA E SHARMA, 1980).

2- OBJETIVO

O experimento realizado tem como objetivo obter preparações cromossômicas de um roedor e observação das metáfases através da coloração convencional.

                                                                                                                             4

3- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Materias:

• Camundongos Macho;
• Solução de conchicina a 0,01 ou 0,1%;
• Éter ou clorofórmio;
• Solução hipotônica de KCI 0,075 M,
• Metanol;
• Ácido acético;
• Seringas e agulhas de insulina;
• Placas de petri pequenas;
• Tubos de centrífugas;
• Pipetas Pasteur;
• Béqueres ( 50, 100, 250 ml);
• Tesouras, pinças, placas de disseção;
• Pêra de borracha para pipeta Pasteur;
• Lâminas;
• Centrífuga;
• Papel toalha;
• Banho- Maria ou estufa;
• Microscópio;
• Balanças;
• Óleo de imersão;
• Lamínulas;
• Provetas;
• Corante Giemsa;
• Água destilada;
• Bálsamo de Canadá;

Metodologia

Inicialmente foi injetado intraperitonealmente solução de colchicina a 0,01%, na razão de 0,1 ml por 10g de peso do animal, logo após esperou-se 20 minutos, sacrificou-se o

                                                                                                                                                     5

animal com éter, e esperou-se sua morte para retirar o fêmur  e restos de músculos nele aderidos para retirar as epífeses.

 Usou-se uma seringa para realizar sucessivas lavagens do canal ósseo, com cerca de 3 ml de solução hipotônica de cloreto de potássio 0,075 M, até retirar a medula óssea que foi recolhida em uma placa de petri. Com o auxílo de uma pipeta Pasteur, transferiu-se a suspenção para tubo de centrífuga e incubou-se  na estufa a 37º C por 15 minutos.

Durante a realização do experimento foi preparado o fixador sendo 30 ml de metanol mas 10 ml de ácido acético e pipetou-se. Em seguida foi levado para a centrífuga a 900 rpm por 5 minutos acrescentando 10 ml de fixador e retirando o sobrenadante entre as centrifugações. Após a última centrifugação foi deixado apenas o sedimento e identificado 5 lâminas por bancada, onde foi gotejado o sedimento nas lâminas identificadas e esperou-se secar a temperatura ambiente.

Dias depois foi realizado a coloração das lâminas, onde foram mergulhadas no corante preparado com 3 ml da solução comercial de giemsa e 97 ml de água destilada, durante 7 minutos, em seguida lavou-se as lâminas em água destilada e esperou-se secar  à temperatura ambiente e observou-se ao microscópio.