A Extração Material Genético

Objetivos:

executar protocolo de extração de dna de vegetais;

Observar moléculas de dna;

Materiais:

1- Béquer de 500ml; Proveta de 100 ml;

2- Detergente comercial, Gelo; Papel de filtro; Bandeja plástica (para fazer banho de

gelo);

3- Água destilada;

4- Cloreto de sódio ou sal;

5- Banho-maria; Cronômetro ou relógio; Bastão de vidro ou pinça, faca e funil; Tubos de

ensaio, mixer, garfo ou liquidificador. * Saco plástico*

6- Etanol 96% (álcool etílico comercial; como alternativa pode ser utilizado também álcool

de cereais 99%, encontrado em lojas de produtos para perfumaria e farmácias de

manipulação);

Procedimento:

1. Picar o vegetal com uma faca; triturá-lo em seguida utilizando um mixer, garfo ou

liquidificador e depositar o extrato formado em um béquer de 500 ml ou proveta;

2. Em um béquer de 100 ml, preparar a solução de lise:

6 ml de detergente concentrado, 4 g de cloreto de sódio, completando o volume com água

até 60 ml;

3. Adicionar à solução de lise (60 ml) ao béquer de 500 ml contendo o vegetal triturado;

4. Homogeneizar a solução de lise com a polpa vegetal e colocar o béquer em banho-maria

por 10 minutos a 55 °C;

5. Preparar um banho de gelo em uma bandeja;

6. Após os 10 min. de banho-maria, transferir o béquer para o banho de gelo por um

período de 5 minutos;

7. Filtrar 4 ml da solução para um tubo de ensaio;

8. Adicionar, delicadamente, 4 ml de etanol gelado ao tubo de ensaio. Durante a adição do

etanol, observar atentamente o que ocorre no tubo;

9. Coletar com pinça ou bastão de vidro um pouco do DNA visível para observar nos

aumentos de 40x, 100x, 400x e 1000x;

10. Esquematizar somente nos aumentos de 400x e 1000x;