Artes

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DISCIPLINA DE BIOFÍSICA

STEVEN HALL

MAYARA CAMPOS

MATEUS SOARES

DETERMINAÇÃO DO ESPECTRO DE ABSORÇÃO DE CORANTES E CONSTRUÇÃO DE CURVA PADRÃO

GOIÂANIA

2014

Introdução

A espectrofotometria é o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e físico-químicas. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A absorção das radiações ultravioletas, visíveis e infravermelhas depende das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida: a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida.

A cor das substâncias se deve a absorção de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos. O instrumento usado na espectroscopia UV/VIS é chamado de espectrofotômetro. Para se obter informação sobre a absorção de uma amostra, ela é inserida no caminho óptico do aparelho. Então, luz UV e/ou visível em certo comprimento deonda (ou uma faixa de comprimentos de ondas) é passada pela amostra. O espectrofotômetro mede o quanto de luz foi absorvida pela amostra.

Materiais e métodos

Material:

• Solução de azul de bromofenol 0,01mg/mL

• Solução de metilorange 0,01mg /Ml

• Solução indefenida

• Espectrofotômetro

• Papel milimetrado

Procedimento:

Determine o espectro de absorção da solução de ABF (azul de bromofenol) e da solução de MO (metilorange), procedendo às leituras nos comprimentos de onda abaixo indicados. Utilize água destilada como branco para calibrar o aparelho em absorbância igual a zero. (nm) 415 445 460 490 520 535 550 580 610 640. Com os dados obtidos, construir um gráfico Abs x comprimento de onda, indicando no gráfico a equação da reta e o r.

Resultados e Discussões

Os resultados das avaliações espectrofotométricas estão descritas abaixo:

nm