Bioquímica

Trabalho de Bioquímica.

O artigo estudado teve como principal objetivo, analisar e comparar as alterações de proteínas que ocorrem nas raízes de sementes de feijão germinando sob longos condições de resfriamento contínuo e expostos ao estresse curto arrefecimento rápido durante a germinação, assim como para determinar as mudanças que ocorrem nas raízes durante a pós -stress recuperação.

Método utilizado: Eletroforese bi-dimensional 2D

A eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2D - PAGE) método tem sido utilizado com sucesso para analisar as alterações gerais na planta, abundância de proteínas em resposta a diferentes tipos de estresse abiótico.

Alguns objetivos da análise de Proteomas

• Separar, identificar e catalogar todas as proteínas existente na amostra biológica analisada.

• Identificar diferenças protéicas específicas que diferem duas ou mais condições que estão sendo comparadas.

Análise Proteômica é dirigida por dois processos: separação de proteínas e análise espectral de massa.

Método de separação de proteínas: Eletroforese bi-dimensional Mw e pI

-Análise espectral de massa (Espectrometria de massa)

-Determinação de massa de proteína intacta

-Determinação de massa de peptídeos obtidos por proteólise limitada

-Determinação estrutural

-Sequência de aminoácidos

Eletroforese bidimensional (2D)

5 etapas:

1- Preparo das amostras (desenho experimental)

2- Extração do conteúdo protéico (tecido, porção específica da célula). Focalização Isoelétrica (IEF),

3- Separação das proteínas por Gel-2D. Eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE).

4- Visualização, quantificação e comparação das proteínas separadas no Gel-2D.

5- Identificação das proteínas de interesse.

Características da eletroforese bidimensional

1. Combinada com a identificação por MS, é uma das principais técnicas utilizadas em estudos proteômicos,

2. Possibilita a separação de misturas complexas de proteínas de acordo com seu pI, volume (massa) molecular, solubilidade e abundância relativa,

3. Pode separar alguns milhares de proteínas simultaneamente dependendo do tamanho do gel, da concentração de acrilamida e bis- acrilamida e da faixa de pH,

4. Produz um mapa de proteínas que reflete alterações nos níveis de expressão, presença de isoformas e de modificações pós-traducionais

5. Permite análises estruturais por MALDI, ESI MS/MS ou seqüenciamento de Edman

Conceitos básicos-