Colaração De Gram

COLORAÇÃO DE GRAM

Jaqueline Pacheco; Laryssa Goedert; Pamela dos Anjos; Priscila Daros

Centro Universitário Católica de Santa Catarina – Campus Joinville

Biomedicina – 2ª Fase – Disciplina de Microbiologia

1 OBJETIVO

Observar as características morfológicas de bactérias e evidenciar diferenças entre células de diferentes espécies ou dentro da mesma espécie pelo uso de corantes apropriados.

2 INTRODUÇÃO

A técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica.

Foi descoberta pelo físico dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. Este cientista obteve com a coloração realizada uma melhor visualização das bactérias em amostras de material infectado. Verificou, no entanto, que nem todas as bactérias coravam com este método o que o levou a sugerir a possibilidade de ser usado um contrastante. Gram morreu em 1935 sem ter conseguido que fosse reconhecida a devida importância ao seu método de coloração. Atualmente, esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.

3 MATERIAL

-Placas de Petri com cultura

-Lâmina

-Cronômetro

-Alça de Platina

-Fósforo

-Microscópio

- Bico de Bunsen

-Corantes específicos para o método de coloração

4 PROCEDIMENTOS

Colocamos no centro da lâmina uma gota de água destilada, um dos lados marcados com um x parte onde será fixada a bactéria. Esquentamos a alça de platina esfriamos no canto da placa e posteriormente pegamos a cultura depositamos no centro da lâmina realizando o esfregaço. Fixamos o esfregaço através do calor até a secagem da mancha. Levamos a lâmina até a pia, cobrimos com cristal violeta deixando agir por 1 minuto. Em seguida lavada a lâmina com água e corada com lugol por mais 1 minuto. Retirado o excesso, lavado com álcool acetona de 2 a 3 vezes e passado um fio de água. Cobrimos com safranina por 30 segundos. Removido o corante e lavada lâmina com um fio de água. Levada a lâmina até a bancada secamos com papel a parte inferior da mesma. E com o auxílio do bico de bunsen realizamos a secagem completa. Preparamos o microscópio para receber a lâmina fixada com E. coli primeiramente e depois realizado o processo descrito acima com a S. aureus. Focalizamos a bactéria no tamanho 4x -10x-40x e 100x com o óleo de imersão.

5 QUESTÕES

1 -Qual a importância da coloração de Gram?

2- Qual a finalidade de se usar lugol e álcool nesse tipo de coloração?