Cultura De células E Tecidos

Trabalho Prático nº1

a) De que material e condições precisa para fazer uma inoculação em caixa de

Petri de amostras de superfícies ou de uma amostra de água?

Para fazer uma inoculação em caixa de Petri, tendo em conta a experiência

realizada nas aulas de CCT, é necessário placas de Petri com meio de cultura, amostras

de água, micropipetas e pontas, espalhador, zaragatoas esterilizadas, tubos Eppendorf

com soluto de Ringuer esterilizados, marcador, câmara de fluxo (e acessórios),

incubadora/câmara de cultura, Álcool.

É necessário também condições de assepsia e em alguns casos trabalhar à chama

dentro da câmara de Fluxo.

b) Quais os procedimentos necessários e cuidados a ter para realizar uma

Esterilização?

A utilização de calor em ambiente húmido é um dos métodos mais eficazes de

destruição de microrganismos.

A morte das células microbianas por ação do calor húmido resulta da desnaturação

das proteínas e da destabilização da membrana citoplasmática. Ocorre quando as

células são sujeitas a temperaturas superiores à temperatura máxima de crescimento

dos microrganismos em causa.

A esterilização por calor húmido é efetuada em autoclave, que consiste numa

câmara com vapor de água saturado à pressão de 1 atm acima da pressão atmosférica,

a que corresponde, em locais ao nível do mar, uma temperatura de ebulição da água

de 121ºC.

Em laboratório, é usual sujeitar o material a esterilizar a 121ºC (1 atm; pressão

relativa) durante 15 minutos, de modo a assegurar a morte de todas as formas de vida

microbianas, incluindo a dos endósporos bacterianos, mais resistentes ao calor que as

células vegetativas. Contudo, o tempo necessário para se esterilizar convenientemente

os materiais, a esta temperatura, depende da natureza do material a esterilizar e/ou

do seu volume.

O calor húmido sob pressão é utilizado na esterilização de meios de cultura que não

contenham componentes termolábeis e na esterilização de material de plástico e de

vidro a utilizar nos trabalhos experimentais.

Para realizar uma esterilização em autoclave é necessário verificar se a agua que

este tem no fundo cobre a resistência do mesmo e que toca no sensor de temperatura

do mesmo.

c) Quais os procedimentos necessários e cuidados a ter para trabalhar numa

câmara de fluxo?

Para trabalhar numa câmara de fluxo é necessário desinfetar a bancada da mesma

com álcool, antes e depois da sua utilização. Da mesma forma é necessário desinfetar

as mãos e todo o material que entra na mesma de forma a evitar contaminações.

Não esquecer que é necessário esperar que o fluxo de ar passe todo pela câmara (aproximadamente 10 minutos), depois de ligar a mesma, para que, quando se começar a trabalhar, termos a certeza que o ar dentro da camara não esta contaminado.

Parte 2. Inoculação em câmara de fluxo

1. Descreva 5 cuidados obrigatórios a ter na manipulação de uma balança.

Num laboratório podem ser encontradas dois tipos de balança: Balanças digitais (para medidas na ordem dos 0.01g) e balanças analíticas (para medidas na ordem dos 0.0001g).

Ao manusear mos tanto uma como outra devemos de ter o cuidado de deixar o prato limpo, para não afetar futuras medições. Para tal devemos de limpar o prato antes e depois de utilizarmos as balanças.

Relativamente as balanças digitais, os cuidados a ter são principalmente as correntes de ar pois, como o prato não se encontra protegido, as correntes de ar podem alterar as leituras e consequentemente induzir erros. Por esta razão, num laboratório, estas devem de estar o menos exposto possível às correntes de ar.

Relativamente as balanças analíticas, e apesar de estas possuírem um vidro a proteger o prato, devido a precisão necessária das medidas que la se efetuam, estas devem ter salas específicas para a sua manipulação, com condições ambientais controladas (temperatura e humidade), bem como observadas as condições da rede elétrica de fornecer voltagem dentro dos limites de tolerância especificados no manual de cada modelo.

Resumindo, cinco dos cuidados a ter na manipulação de uma balança são: verificar se o prato não está sujo antes da utilização da mesma, deixar o prato limpo depois da utilização da mesma, evitar correntes de ar, nunca pesar material diretamente no prato (utilizar um vidro de relógio, por exemplo) e ter atenção á voltagem fornecida à mesma.

2. Descreva 5 cuidados obrigatórios a ter na manipulação de um equipamento de medição de pH.

Existem vários tipos de medidor de ph, no entanto, todos possuem um elétrodo que deve de ser mantido limpo de forma a evitar erros de leitura.

Posto isto, ao usar um medidor de Ph devemos de manter o elétrodo limpo, fazer a recuperação do mesmo, ou seja, aplicar um tratamento ao elétrodo após o mesmo sofrer um uso prolongado que pode levar a deposição de material no mesmo, fazer uma calibração regular do aparelho de acordo com as soluções de calibração, após cada utilização passar o elétrodo por água destilada e mante lo guardado numa solução apropriada que é ligeiramente ácida.

3. Descreva 5 cuidados obrigatórios a ter na autoclavagem de material.

Ao utilizar um autoclave devemos de verificar se a resistência esta coberta