Experimento Hidrólise Do Amido

1. INTRODUÇÃO E OBJETIVOS

1.1 INTRODUÇÃO

O amido possui moléculas de glicose em sua estrutura. A solução de amido em presença de HCl ou em presença de enzimas, sofre hidrólise em suas ligações, obtendo compostos intermediários em colorações diferentes durante o processo que demonstrem a hidrólise completa do amido e moléculas de glicose como produto final. Pela ação da enzimas os produtos finais serão a dextrina, maltose e isomaltose.

A hidrólise pode ser acompanhada pela alteração de cor durante o processo, indicando a presença ou não do amido, quando o Amido fica preso na amilase produzida pelo adição do Iodo, ficando azul, Amilodextrina na coloração roxa, Erhrodextrina na cor vermelha, e um amido completamente hidrolisado na forma de Glicose e Maltose na cor amarela. Essa hidrólise também pode ser acompanhada pelo aumento de concentração de açúcar e dependo de sua quantidade pode variar do verde amarelado ao vermelho tijolo.

1.2 OBJETIVOS

Com enzima Amilase, fazer hidrólise de amido em uma primeira etapa e Hidrólise Ácida em uma segunda etapa.

2 MATERIAIS E MÉTODOS

2.1 MATERIAIS

- Placa escavada

- 6 tubos de ensaio

- Béquer de 100mL e 50mL

- Pipetas volumétricas de 5mL e 10mL

- Pipeta Pasteur

- Bastão de Vidro

- Proveta de 100 mL

- Banho - Maria

- Amido

- HCl concentrado

2.2 MÉTODOS

2.2.1 HIDRÓLISE ENZIMÁTICA

1. Preparado 100mL da solução de amido 1% (p/v) utilizando água destilada aquecida para solubilizar o amido. Foi pesado e utilizado 01g de Amido e completado para 100mL, desses foram pegos 99mL na proveta.

2. Transferido 2mL da solução de amido e 2mL de lugol para 3 tubos de ensaio.

3. Preparado os tubos controle para a reação de lugol (parâmetros para os resultados da hidrólise):

- Controle positivo: 2mL de solução de amido + 2 mL de lugol.

- Controle negativo: 2mL de água destilada + 2 mL de lugol.

4. Amilase foi coletada em um béquer.

5. Foi realizada uma diluição de 1:10 da amilase, transferindo 1mL de amilase + 9 mL de água destilada para um tubo de ensaio.

6. Transferido 2 mL de amilase para um tubo e fervido a solução diretamente no bico de Bunsen utilizando uma pinça de madeira.

7. Iniciado a hidrólise enzimática foi pipetado 0,5 mL de amilase pura, diluída na proporção de 1:10 e fervida para seus respectivos tubos de ensaio em solução de amido.

8. Agitado rapidamente e transferido uma alíquota (01 gota) da amostra para a reação de lugol para a placa escavada (tempo zero).

9. Adicionado 1 gota de lugol no mesmo poço da placa escavada onde foi colocada a alíquota no tempo zero.

10. Foram coletadas as alíquotas no tempo de 10 e 20 minutos, repetindo os passos 8 e 9.

11. Observado a coloração na placa escavada e comparado com os controles positivo e negativo.

2.2.2 HIDRÓLISE ÁCIDA

1. Transferido 10mL da solução de amido preparada anteriormente para um tubo de ensaio.

2. Incubado em banho-maria fervente durante 10 minutos.

3. Adicionado 2mL de HCl concentrado e homogeneizado a solução.

4. Transferido uma alíquota de 01 gota da amostra para a reação de lugol para a placa escavada no tempo de zero minutos.

5. Adicionado 01 gota de lugol no mesmo poço da placa escavada onde foi colocada a alíquota do tempo zero.

6. Coletado as alíquotas no tempos de 5, 10,15, 20 e 25 minutos repetindo os passos 4 e 5 da Hidrólise Ácida.

3 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Hidrólise Enzimática

Tempo (min) Amilase