O Estudo das Enzimas Embriologia Semana 01

Pratica 5 – Estudo das Enzimas

Material:

• Tubos de ensaio de 5 mL (10 tubos) e suporte, pinça para ferver os tubos no bico de gás
• Banho Maria a 37 oC
• Bico de gás

Reagentes:

Solução de sacarase (levedo de padaria 1 g%)

Solução de sacarose a 2%

Solução de amido a 1 %

 Reagente de Benedict

Amostra de saliva dos alunos

Procedimento A - Especificidade enzimática

1. Lavar bem a boca com água e coletar cerca de 2 mL de saliva (cuspir diretamente no tubo).
2. Colocar respectivamente em 4 tubos de ensaio numerados:

1. 1 mL de sacarase + 1 mL de sacarose a 2%
2. 1 mL de sacarase + 1 mL de amido a 1%
3. 1 mL de saliva + 1 mL de sacarose a 2 %
4. 1 mL de saliva + 1 mL de amido a 1%

1. Deixar a temperatura ambiente por 20 minutos.
2. Adicionar, em seguida, a cada um dos tubos 1,0 mL do reagente de Benedict. Aquecê-los até  a ebulição por 1 minuto diretamente no fogo, usando pinça.
3. Observar os resultados anotando em quais tubos houve atividade enzimática, observando      indiretamente pela redução do cobre/marrom (mudança de cor).

Procedimento B - Termolabilidade

1. Colocar respectivamente em 2 tubos de ensaio numerados:

1. 1 mL de sacarase + 1 mL de água destilada. Ferver diretamente na chama e resfriar em água corrente em seguida
2. 1 mL de sacarase + 1 mL de água destilada – não ferver

1. Adicionar 1 mL de sacarose a 2 % em cada um dos 2 tubos
2. Incubar os 2 tubos em banho Maria a 37 oC por 10 minutos
3. Adicionar 1 mL do reagente de Benedict aos 2 tubos e aquecê-los até a ebulição
4. Observar os resultados anotando em que tubo houve atividade enzimática

Procedimento C (concentração enzimática)

1. Colocar respectivamente em 4 tubos de ensaio numerados:

1. 0,2 mL de sacarase + 0,8 mL de água destilada + 1 mL de sacarose
2. 1 mL de sacarase + 1 mL de sacarose
3. 1 mL de água destilada + 1 mL de sacarose
4. 1 mL sacarase + 1,0 mL de agua destilada

* a solução de sacarose usada é de 2 % em todos os tubos

1. Incubar os 4 tubos de ensaio em banho Maria 37 oC por 10 minutos
2. Adicionar aos 4 tubos 1 mL de reagente de Benedict e aquecê-los até a ebulição.
3. Observar os resultados anotando, pelo grau de intensidade de redução do cobre, em quais tubos houve atividade enzimática.

Apenas interpretar os 2 experimentos seguintes:

Os 2 próximos experimentos devem ser analisados pelo grupo. O procedimento e o resultado  obtido serão descritos e o grupo deve interpretar e justificar porque estes resultados foram encontrados.

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