Salmonelose dignostico molecular

gv/1 Introdução

    A salmonelose, e uma doença causada por bactérias do gênero Salmonella, pode causa doenças em humanos e animais, é transmitida através do consumo e da ingestão de alimentos contaminados, tornando-se assim, uma grande preocupação para saúde publica mundial, pelo fato de ser responsável por graves intoxicações alimentares, podendo trazer sérios ricos a saúde. ( WHITE et al., 1997).

     No Brasil, nos últimos anos vários estudos tem registrado um aumento considerado de relatos de surtos por salmonelas, os principais casos confirmados ocorrem nas regiões norte e nordestes do país, isso devido  aos costumes  culturais de alimentação dessas regiões e a necessidades de optar por produtos com menor preço, muitas vezes de pior qualidade e mais contaminados, ou até mesmo pelo falta do armazenamento inadequado dos produtos facilitando assim o desenvolvimento da doença.  

     Sendo transmitida principalmente por ingestão de carne e ovos de aves contaminados, sua multiplicação se da a partir sobre temperaturas de 38 ºC , já em temperaturas abaixo de 5°C seu desenvolvimento é interrompido, a patogenicidade das salmonelas varia muito de acordo com as condições de saúde do hospedeiro. As crianças, assim como imunocomprometidos e as pessoas idosas, igualmente enfrentam um risco relativamente mais elevado de morte (FRANCO e LANDGRAF, 2004). Após a ingestão do alimento contaminado por salmonela o período de incubação no homem leve cerca de 8  a 36h horas aproximadamente, os principais sintomas são cefaleias, náuseas, vômitos eventuais, cólicas  abdominais e diarreia  em alguns casos o individuo    

    O isolamento e identificação de Salmonella ssp, em um espaço menor de  tempo e maior confiabilidade em amostras de alimentos possíveis contaminados, torna-se cada vez mais necessário, assim  novos métodos são testadas  e desenvolvidos com intuito de melhorar e agilizar estes diagnósticos microbiológicos, evitando assim possíveis consequências para saúde publica.

   Para Tortora et.al 2012,  o isolamento da bactéria do alimento e necessário para o diagnóstico, esse procedimento requer meios de cultura específicos, seletivos e diferenciados, geralmente esse procedimento e lento para chegar ao diagnostico e também na identificação do patógeno, outra dificuldade encontrada muitas vezes e a pequena quantidade de Salmonella spp. dificultado sua detecção.

Uma dessas novas técnicas que foram desenvolvidas destaca-se a reação de cadeia de polimerase PCR, vem sendo empregada com êxito para detecção de  de microrganismo  principalmente salmonella, em diferentes amostras tais como carnes, ovos e leite. A PCR permite a replicação in vitro de sequências definidas de DNA, não sendo necessário, para isto, conhecer a estrutura completa do DNA alvo, mas apenas aquelas que flanqueiam a região a ser amplificada, definida por primers ou iniciadores, que hibridizam com estas regiões (MULLIS ET AL., 1986). A PCR tem habilidade de detecção de uma única região do genoma bacteriano, assim comparado às outras técnicas microbiológicas utilizadas tradicionalmente seus resultados são mais específicos. Já em relação ao tempo no diagnóstico Assim a técnica de reação em cadeia pela polimerase (PCR) pode se apresentar como uma alternativa para triagem de amostras, oferecendo resultados em cerca de 48 horas (PONTES, 1999, OLIVEIRA, 2000,SANTOS ET AL., 2002).

Desse modo, vemos que a samonelose é uma questão de saúde publica mundial que sua disseminação pode levar sérios riscos. Assim, vale ressaltar a importância da verificação de presença ausência deste patógeno nos alimentos. Vale ressaltar que as técnicas microbiológicas convencionais possuem custo e tempo de execução elevado. Em contrapartida, o diagnósticomolecular é inovador, de alta sensibilidade e especificidade, tendo como principal vantagem à redução do tempo da análise.

2. Revisão bibliográfica

2.2 Taxonomia

   O gênero Salmonella pertence à família Enterobacteriaceae e compreendem bacilos Gram negativos não produtores de esporos. É constituído por bastonetes de 0,5 a 0,7 por 1 a 3 micrômetros. São anaeróbios facultativos, produzem gás a partir de glicose (exceto S.Typhi) e são capazes de utilizar o citrato como única fonte de carbono. A maioria é móvel, através de flagelos peritríquios, exceção desta à S. pullorum e à S. gallinarum, que são imóveis. A taxonomia do gênero Salmonella é baseada na composição de seus antígenos de superfície, existem três diferentes tipos de antígenos que podem identificar os sorovares que são os antígenos somáticos (O), os flagelares (H) e os capsulares  de virulência (Vi). (FRANCO e LANDGRAF, 2004).

    O antígeno somático O apresenta-se na porção mais externa da parede bacteriana e corresponde à parte antigênica da camada de lipopolissacarídeos (LPS) presentes na membrana celular de todas as bactérias Gram negativas como Salmonella sp. (REEVES et al., 1996; SELANDER et al., 2002). Já os antígenos H da fase um são homólogos a outras bactérias entéricas, enquanto antígenos H de fase dois são específicos do gênero Salmonella (BARROW, 2010)

    Hoje se conhece mais de 2.600 sorotipos nas várias subespécies de Salmonella, entre elas a subespécie entérica apresenta a maior frequência em amostra analisadas (99%) de sorotipos do homem e animais de sangue quente, sendo que mais de  200 tipos já foram relacionadas  com casos de intoxicação alimentar e  infecção sistemática no homem, mas apenas vinte ocorrem com mais frequência (Berchieri, 2000; Scharr, 2003; Grimont e Weill, 2007). Entres estes sorotipos  podemos encontrar alguns exclusivamente no homem (Typhi e Paratyphi A), outros são hospedeiros  específicos, como aves (Gallinarum e Pullorum),ovinos  (Abortusovis), suínos (Choleraesuis) entre outros. Também existem sorotipos denominados paratíficos (como Typhimurium, Enteritidis e mais recentemente Heidelberg) que apresentam diversidade de hospedeiros (entre os quais o homem) e que podem causar doença, sendo, portanto de grande importância epidemiológica (Loureiro et al., 2010).

Testes diagnósticos

         Até o momento a identificação dos sorotipos é realizada com análise antigênica de isolados de Salmonella spp. com o uso de anti-soros específicos.Para realizar o isolamento de utilizando amostras fecais, geralmente são feitos meios diferenciais  de baixa e elevada seletividade,sendo que o meio de baixa  seletividade  incluem o agar MacConkey, o Eosina Azul de Metileno (EMB) e o Agar Teague. Já os meios de seletividade intermediária incluem Hektoen, XLD e SS, e os meios de alta seletividade incluem ágar sulfito bismuto e ágar verde brilhante. Também são frequentemente utilizados caldos de enriquecimento para Salmonella, entre eles o caldo tetrationato, o caldo selenito e o caldo GN (Gram negativo).No segundo momento, as colônias que formam aspectos compatível com Salmonela são inoculadas em sistemas de triagem bioquímica  tais como Agar dois açúcares ferro Kligler – KIA, Agar ferro triplo açúcar – Agar TSI,  meio Rugai ou EPM-MILi. (BOPP, 1999; OPLUSTIL et al., 2000). ( Figura 1)