Óleo De Lorenzo

ELETROFORESE

A eletroforese é um dos métodos biofísicos de estudo das soluções e consiste na separação dos componentes de um sistema pela aplicação de um campo elétrico. É um dos métodos mais usados no laboratório, tanto na forma fundamental como nas variantes.

Quando uma solução é submetida a um campo elétrico, os cátions migram para o cátodo (pólo negativo) e os ânions, para o ânodo (pólo positivo). A técnica de eletroforese permite a separação analítica ou preparação dos componentes de uma mistura de várias espécies iônicascom cargas diferentes. Além da separação qualitativa de partículas carregadas, a eletroforese permite separar partículas com a mesma carga, porém com quantidades de cargas diferentes. Tomando como exemplo as proteínas, que são polieletrólitos com cargas dependentes do pH do meio circundante, pode-se utilizar a técnica de eletroforese a fim de separar uma mistura dessas moléculas.

OBJETIVO

Realizara separação eletroforética de proteínas do soro

MATERIAIS

 Cuba para coloração e fonte de eletroforese

 Fita de gel de agarose

 Papel de filtro

 Placas de Petri

 Pinça

 Secador de cabelos

 Becker

 Capilares

REAGENTES

 100 ml de corante negro de amido

 Solução tampão tris (9,5) mantém o pH do gel de agarose

 Descorante - 200 ml de ácido acético a 5%

 Soro sanguineo humano

MÉTODO

1. Colocar 120 ml de tampão na cuba.

2. Separar o gel de agarose da placa de acrílico.

3. Aplicar o soro nas canaletas verticais em frente ao número da placa do gel de agarose com microcapilar.

4. Colocar o gel de agarose na cuba, voltado para baixo, coincidindo o lado (+) do gel com o (+) da cuba e o lado (-) do gel com o (-) da cuba.

5. Tampar a cuba, ligar, verificar se há formação de bolhas nos cantos e deixar por 30 min a 100 volts.

6. Desligar a cuba.

7. Retirar o gel de agarose da cuba, eliminando o excesso de tampão das bordas com papel de filtro.

8. Mergulhar o gel, voltado para cima, em 200 ml de corante por 15 min sem agitação.

9. Retirar o gel de agarose com uma pinça do corante e coloc á-lo, sempre voltado para cima, em 200 ml de ácido acético a 5% (descorante), com agitação, por 30 segundos.

10. Retirar o excesso de descorante do gel de agarose e colocar a 60ºC, onde usamos secador de cabelo, até que fique completamente seco.

11. Colocar o gel de agarose em banhos sucessivos de descolorante