A Bioquímica

Introdução

As enzimas são proteínas com propriedades catalisadoras sobre as reações que ocorrem nos sistemas biológicos. Elas têm um elevado grau de especificidade sobre seus substratos acelerando reações específicas sem serem alteradas ou consumidas durante o processo. O estudo das enzimas tem imensa importância clínica. Em algumas doenças as atividades de certas enzimas são medidas, principalmente, no plasma sanguíneo, eritrócitos ou tecidos. Todas as enzimas presentes no corpo humano são sintetizadas intracelularmente.

A amilase  é uma enzima digestiva que encontrada no suco pancreático e na saliva, tem como função a quebra de amidos e açucares, também quebra carboidratos transformando-o em glicose. O amido é a forma de armazenamento de glicose nos vegetais, sendo constituído por uma mistura de amilose (amido não ramificada) e amilopectina (amido ramificado). A estrutura do glicogênio é similar ao da amilopectina, com maior número de ramificações. A α-amilase catalisa a hidrólise das ligações α-l,4 da amilose, amilopectina e glicogênio, liberando maltose e isomaltose. Não hidrolisa as ligações α-1,6

A amilase sérica é secretada, fundamentalmente, pelas glândulas salivares (forma S) e células acinares do pâncreas (forma P). É secretada no trato intestinal por meio do ducto pancreático. As glândulas salivares secretam a amilase que inicia a hidrólise do amido presente nos alimentos na boca e esôfago. Esta ação é desativada pelo conteúdo ácido do estômago. No intestino, a ação da amilase pancreática é favorecida pelo meio alcalino presente no duodeno. A atividade amilásica é também encontrada no sêmem, testículos, ovários, tubos de Fallopio, músculo estriado, pulmões e tecido adiposo. A amilase tem massa molecular entre 40.000 e 50.000 daltons sendo, facilmente, filtrada pelo glomérulo renal.

ENSAIO QUANTITATIVO DA INIBIÇÃO DA ALFA- AMILASE POR EXTRATOS DE FRUTOS E PLANTAS DO CERRADO

Introdução:

A alfa amilase, principal produto de secreção do pâncreas e das glândulas salivares, é uma proteína monomérica cálcio dependente, responsável pela catálise da hidrolise inicial de amidos em oligossacarídeos mais curtos por meio da clivagem de ligações a-D(1-4) glicosídicas. Prevenir ou retardar a absorção de glicose por meio da inibição de hidrolases glicosídicas nos órgãos digestivos pode representar uma abordagem promissora no tratamento do diabetes e das suas complicações.

Objetivo:

Esta prática tem como objetivo principal investigar a atividade da alfa-milase purificada parcialmente na saliva humana e o potencial de inibição da sua atividade por extratos de frutos e plantas do Bioma do cerrado.

Materias:

- Microplacas de 96 poços

- Tampão MES: 50mmol/L de ácido 2-(N-morfolino)- etanossulfônico ( MES), contendo 5 mmol/L de cloreto de cálcio, 140 mmol/L de tiocianato de potássio e 300 mmol/L de cloreto de sódio (Ph 6,0)

-Alfa- amilase salivar ( f-AS): Para o preparo da F-AS, saliva humana foi coletada e armazenada a – 20ºC por 48 horas. Após esse período, a saliva foi descongelada e centrifugada a 12000 xg por 10 minutos a 20ºC. O sobrenadante foi fracionado em uma coluna de Q-sefarose utilizado como fase móvel, um tampão contendo 50 mmol/L de Tris-HCL( Ph 8,0), 10 mmol/L de EDTA e 10mmol/L de EDTA. O volume de exclusão da coluna Q-Sefarose foi dialisado em tampão de bicarbonato de amônio ( 50 mmol/L, ph 7,0), liofilizado e solubilizado em tampão MES (Ph 6,0)

- Frações e extratos a 1mg/ml ( diluído em dimetilsufoxico/ água destilada)

- Arcabose a 1 mg/ml ( diluído em água destilada)

- Substrato GAL-G2-a-CNP a 12 mmol/L ( diluído em tampão MÊS)

Métodos

Foram preparados 4 eppendorf, um sendo o controle negativo contendo 5µL de tampão mais 45µL  da enzima f-AS, outro contendo 5µL da acarbose mais 45 µL da enzima f-AS sendo esse nosso controle positivo, outro contendo 5µL do extrato de araticun com 45 µL da enzima f-AS e no ultimo contendo 5µL do extrato de mangaba com 45µL da enzima f-AS, todos as amostras foram incubadas por 30 min a 37ºC.