A Determinação do Triglicérides

UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE – CCB
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR – DBB
BQI 341 – BIOQUÍMICA CLINICA[pic 1][pic 2]

Determinação do Triglicérides

Wesley Elias Bhering Barrios - 70327

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Introdução

Os triglicerídeos, triglicérides ou triacilgliceróis são os lipídeos mais simples construídos a partir de ácidos graxos, e possuem a estrutura característica mostrada abaixo:

Esses lipideos possuem a função de armazenamento de energia e isolamento térmico ,e em células eucarióticas se dispõe em forma de gotículas, formando grandes depósitos celulares desta molécula. Os adipócitos possuem lipases que clivam os triacilgliceróis e liberam ácidos graxos livres para serem transportados para os locais onde são necessários.[pic 3][pic 4][pic 5]

O tecido adiposo está presente sob a pele, na cavidade abdominal e nas glândulas mamárias. Pessoas moderadamente obesas podem manter suas necessidades energéticas por meses pois possuem cerca de 15 a 20 Kg de triacilgliceróis depositados em seu tecido adiposo.[pic 6]

Estas moléculas juntos com o colesterol, ésteres de colesterila e fosfolipídeos são transportados na corrente sanguínea como lipoproteínas; compostos macromoleculares de proteínas transportadoras específicas, chamadas de apolipoproteínas. Elas se combinam com os lipídeos formando várias classes de partículas lipoproteicas, com diferentes densidades. Cada uma dessas classes possui uma função diferente e específica, determinada pelo seu local de síntese , composição lipídica e seu conteúdo apolipoprotéico.

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Figura 3 - Tamanho de cada uma das apolipoproteínas – Lehninger 6ª edição

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Figura 4- Lipoproteínas e Transporte dos lipídeos - Lehninger 6ª edição

“A VLDL transporta o colesterol, os ésteres de colesterila e os triacilgliceróis do fígado para os demais tecidos, onde os triacilgliceróis são degradados pela lipase lipoproteica, convertendo VLDL em LDL. A LDL, rica em colesterol e seus ésteres, é captada por endocitose mediada por receptor, em que a apolipoproteína B-100 da LDL é reconhecida pelos receptores na membrana plasmática.
Condições alimentares ou defeitos genéticos no metabolismo do colesterol podem levar à aterosclerose e a doenças cardíacas. No transporte reverso do colesterol, HDL remove colesterol dos tecidos periféricos, transportando-o para o fígado. Por reduzir o conteúdo de colesterol das células espumosas, HDL protege contra aterosclerose. ”  Lehninger 6ª edição

A determinação dos níveis de triglicérides no plasma é de grande importância, pois conhecendo-se os valores padrão, podemos estimar o risco cardíaco e determinar as frações das lipoproteínas.

Materiais e Métodos

• Espectrofotômetro ou colorímetro,
• Banho-maria 37°C,
• Relógio ou cronômetro,
• Pipetas,
• Ponteiras,
• Tubos de ensaio,
• Biocontrol N e Biocontrol P Bioclin(reagente utilizados para determinação de triglicérides),
• Soro,
• Luvas.

O método de determinação dos triglicérides é enzimático colorimétrico e baseia-se na medição da intensidade da cor do cromógeno cereja formado através das seguintes reações:

[pic 11]

Sendo que a intensidade da cor é proporcional à quantidade de triglicérides no soro.

Marcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padrão), e proceder como a seguir:

	Branco	Padrão	Amostra 1	Amostra 2
Amostra 1	-	-	10 µL	-
Amostra 2	-	-	-	10 µL
Reagente Nº1	1,0 mL	1,0 mL	1,0 mL	1,0 mL
Reagente Nº2		10 µL

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria à 37ºC por 10 minutos. Ler a absorbância das Amostras e do Padrão em 500 nm (490 - 540 nm), acertando o zero com o Branco. A cor é estável por 30 minutos.

Os cálculos serão realizados seguindo as seguintes fórmulas:

Triglicérides (mg/dL) = (Absorbância da Amostra x 100) / Absorbância do Padrão

Como a reação segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de Calibração pode ser usado.

Fator de Calibração = Concentração do Padrão (100 mg/dL)/ Absorbância do Padrão

Triglicérides (mg/dL) = Absorbância da Amostra x Fator de Calibração

Os resultados serão expressos em mg/dL.

O VLDL pode ser calculado como a concentração de Triglicérides divido por 5 e o LDL pode ser calculado como O colesterol total menos o HDL menos o VLDL; como expresso abaixo:

 e [pic 12][pic 13]

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Resultados e Discussão

Obtivemos os seguintes resultados:

Bancada 2:

Amostra	Absorbância
Padrão	0,088
Amostra 1	0,014
Amostra 2	0,032