Cinética enzimática

Introdução

A cinética enzimática favorece uma melhor compreensão do mecanismo de ação das enzimas. A relação entre a concentração de substrato e a velocidade da reação enzimática pode ser mostrada graficamente no formado XY. Com uma determinada concentração de substrato, variando de cada enzima, a Vmáx não aumenta claramente, essa enzima se encontra saturada. A concentração de substrato necessária para encontrar a metade da velocidade máxima é chamada de Km (constate de Michaelis). De acordo com o experimento realizado em sala, tem-se como objetivo a influência das concentrações da enzima e do substrato sobre a atividade enzimática, a velocidade máxima (Vmáx) e a constante de Michaelis (Km).

Metodologia

Fez-se a distribuição, descrita na tabela a seguir, de tampão acetato pH 4,5, solução de sacarose e enzima invertase, em nove tubos de ensaio, devidamente numerados.

Tab. 1: Distribuição de quantidades de reagente em cada tubo.

Reativos (ml) Tubos

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Água destilada 2,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3 1,3

Sacarose 0,01 M - 1,0 - - - - - - -

Sacarose 0,02 M - - 1,0 - - - - - -

Sacarose 0,05 M - - - 1,0 - - - - -

Sacarose 0,1 M - - - - 1,0 - - - -

Sacarose 0,2 M - - - - - 1,0 - - -

Sacarose 0,25 M - - - - - - 1,0 - -

Sacarose 0,3 M - - - - - - - 1,0 -

Sacarose 0,4 M - - - - - - - - 1,0

Invertase 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2

Após a adição dos reagentes, incubou-se os tubos a 55°C durante 10 minutos. Logo em seguida adicionou-se 1mL de DNS em novos tubos, Depois foi retirada alíquotas de 100 µL de cada tudo de ensaio que estava incubado a 55ºC e transferiu para os tubos contendo DNS, os mesmo foram colocados em banho de água fervente por 10 minutos, posteriormente ao resfriamento dos mesmos, adicionar 10 mL de água destilada leu-se a absorbância de cada tubo em espectrofotômetro a 570 nm. Com os resultados, foi construído o gráfico da concentração de substratos versus velocidade de reação.

Resultados e Discussões

Obtiveram-se as seguintes absorbâncias no espectrofotômetro:

Tubo 1 0

Tubo 2 0,030

Tubo 3 0,827

Tubo 4 0,113

Tubo 5 0,285

Tubo 6 0,264

Tubo 7 0,387

Tubo 8 0,488

Tubo 9 0,562

O tubo 1 não entrou na listagem pois ele é realizado para efeito de ensaio em branco, o valor lido neste tubo é descontado nos outros automaticamente pelo programa que realiza