Metodo do Biureto

OBS: A proposta apresentada não ficou clara, principalmente na parte de resultados e discussões onde foi pedido o cálculo de concentração, porém não foi dada a absorbância e pela falta de informações e não compreendimeto total por minha parte estou enviando o relatório que fiz quando realizamos a prática referente a técnica do Biureto quando fiz a matéria presencial, caso não aceitem por favor deixar a proposta de vocês mas clara para que eu possa refazer.

INTRODUÇÃO

 

      O método do biureto é baseado na reação do reativo do biureto, constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução. 

       O cobre, em meio alcalino reage com proteínas formando um complexo de coloração violeta que apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 540 nm. A banda da região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos, pois diversas substancias presentes na maioria dos meios analisados, absorvem na região de 270 nm, causando interferência.  

Aminoácidos e dipeptídeos não reagem no método do biureto, pois é necessário que o composto apresente pelo menos dois enlaces peptídicos na molécula para que a reação seja positiva. 

       Métodos espectroscópicos são, fundamentalmente, a determinação da concentração de espécies químicas em uma amostra mediante a absorção de radiação eletromagnéticas entre o ultravioleta e o infravermelho quando os seus elétrons se movimentam entre níveis energéticos.  

Ocasionalmente há substancias que não absorvem luz, significativamente em nenhum comprimento de onda. Nestes casos utilizam-se os chamados métodos colorimétricos. O Composto analisado é posto em contato com um reagente específico, de modo a desenvolver uma cor cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração da substância na mistura original. 

      O espectrofotômetro é um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromática através de uma amostra, medindo a quantidade de luz que foi absorvida. Usando um prisma ou uma rede de difração que o aparelho separa a luz policromática proveniente da fonte em feixes com diferentes comprimentos de onda que passa através da amostra permitindo-nos saber a quantidade de luz absorvida cada comprimento de onda. É possível descobrir o comprimento de onda que o composto mais absorve através do espectro de absorção, que é o conjunto das absorbâncias de um composto específico para vários comprimentos de onda. 

  

      A Lei de Lambert-Beer determina que a absorbância é diretamente proporcional a concentração da espécie absorvente. Podemos definir uma equação relacionando estes fatores: A = ε. l.c 

Onda A é a absorbância definida por-log It/I0, onde I0 é a intensidade de luz incidente e It é a intensidade da luz transmitida, ε é absortividade molar; l é o caminho óptico; e C é a concentração da substância. 

Podemos utilizar uma solução com concentração conhecida de certa substância e construir um diagrama de absorbância em função da concentração, sendo possível medir a quantidade desconhecida, desde que estejam nas mesmo condições da primeira medição. 

 

OBJETIVOS  

       Construção da curva padrão de Biureto para uma proteína e a determinação da concentração desta proteína em uma solução desconhecida.  

 

PROCEDIMENTOS  

Numerar 7 tubos de ensaio e colocar as seguintes soluções: 

• Tubo Nº1: 1 mL de solução de albumina a 1%.   
• Tubo Nº2: 1 mL de solução de albumina a 2%. 
• Tubo N°3: 1 mL de solução de albumina a 4%. 
• Tubo N°4: 1 mL de solução de albumina a 6%. 
• Tubo Nº5: 1 mL de solução de albumina a 8%. 
• Tubo Nº6: 1 mL de solução de albumina desconhecida. 
• Tubo N°7: (branco): 1 mL de água. 

Acrescentar a cada tubo 5 mL de solução diluída de Biureto. 

Colocar os tubos em banho Maria a 32°C por 30 minutos. 

Ler a absorbância a 540nm. 

Construir o gráfico da absorbância versus concentração com os resultados obtidos de absorbância dos tubos 01 a 05. 

 

 

 

 

 

RESULTADOS E DISCUSSÕES

 

Resultados Obtidos de absorbância dos tubos 01 ao 07: 

N° do tubo	Porcentagemda solução (%)	Leitura
Tubo N° 1	1mLde solução de albumina a 1%.	0,240
Tubo N°2	1mLde solução de albumina a 2%.	0,369
Tubo N°3	1mLde solução de albumina a 4%.	0,587
Tubo N°4	1mLde solução de albumina a 6%.	0,730
Tubo N°5	1mLde solução de albumina a 8%.	1,040
Tubo N°6	1mLde solução de albuminadesconhecida.	0,609
Tubo N°7	1mLdeágua.	0,0

 

      Com o gráfico podemos observar que a absorbância a 540nm cresce linearmente em função do aumento da concentração de albumina.