ANÁLISE QUALITATIVA DE PROTEÍNAS: MÉTODO DO BIURETO

Universidade Estácio de Sá

Curso de Farmácia

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ANÁLISE QUALITATIVA DE PROTEÍNAS:

MÉTODO DO BIURETO

Petrópolis

2013

Alex de Paula

Ana Carolina Mello

Bruna Penso

Desiree Costa

Luiz Fernando Brazão

Renata Tardeli

ANÁLISE QUALITATIVA DE PROTEÍNAS:

MÉTODO DO BIURETO

Relatório da aula prática realizada em 25/09/13

elaborado pela professora Fernanda Retondaro,

na disciplina de Bioquímica

Petrópolis

2013

1.  Fundamentos

  A reação do biureto é característica para identificação de proteínas; para que a reação do biureto seja positiva há necessidade da presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula. Sendo assim, essa reação é positiva para todas as proteínas, devido às suas ligações peptídicas. A positividade da reação verifica-se pelo aparecimento de uma coloração que varia do róseo ao violeta.

2.  Objetivo

A prática tem como objetivo observar a presença de proteínas em material biológico ultilizando o método do biureto.

3.  Materias

 - Tubos de ensaio

 - Pipetas 1 mL

 - Vortex

4. Reagentes

- Água destilada

- Glicose 0,1M

- Solução de clara de ovo 5%

- Solução de clara de ovo 20%

- Pedaço de carne (1cm)

- Solução de BCAA 0,5% (aminoácidos de cadeia ramificada)

- Leite

- Reagente biureto

5. Procedimentos

Preparo das soluções:

- Solução de clara de ovo 5%: Em um tubo de ensaio, adicionar 1,9 mL de água destilada e acrescentar 0,1 ml de clara de ovo.

-  Solução de clara de ovo 20% : Em um tubo de ensaio, adicionar 1,6 mL de água destilada e acrescentar 0,4 ml de clara de ovo.

A seguir, numerar 8 tubos de ensaio e adicionar:

- Tubo 1, adicionar 1 mL de água destilada

- Tubo 2, adicionar 1mL de glicose 0,1M

- Tubo 3, adicionar 1mL  de solução de clara de ovo 5%

- Tubo 4, adicionar 1mL  de solução de clara de ovo 20%

- Tubo 5, adicionar 1 pedaço (1 cm) de carne

- Tubo 6, adicionar 1 mL de solução de BCAA 0,5%

- Tubo 7 adicionar 1 mL de leite

- Tubo 8 adicionar 1 mL de saliva

Acrescentar 1 mL do reagente biureto em cada tubo e homogeneizar no vortex.  Observar e anotar o que ocorreu.

6. Resultados

 

Tubo 1	Água destilada	Azul
Tubo 2	Glicose 0,1m	Azul
Tubo 3	Clara de ovo 5%	Roxo
Tubo 4	Clara de ovo20%	Roxo
Tubo 5	Carne	Roxo
Tubo 6	BCAA 0,5%	Azul
Tubo 7	Leite	Roxo
Tubo 8	Saliva in natura	Roxo/ Lilás

7. Conclusão

Ao observar os resultados concluímos que os tubos 3,4,5,7 e 8 contendo clara de ovo5%, clara de ovo 20%, carne, leite e saliva foram positivas para a presença de proteínas, comprovado pela coloração que vai do róseo ao violeta(roxo) obtida ao reagirem com o biureto.

Tubo 1	Água destilada	Controle negativo
Tubo 2	Glicose 0,1m	Carboidrato
Tubo 3	Clara de ovo 5%	Menos concentrada
Tubo 4	Clara de ovo 20%	Mais concentrada
Tubo 5	Carne	Actina e miosina
Tubo 6	BCAA 0,5%	3 aminoácidos livres não reage
Tubo 7	Leite	Cadeina e miosina
Tubo 8	Saliva in natura	Amilase

DESNATURAÇÃO ENZIMÁTICA

1. Fundamentos

A desnaturação protéica é a perda de atividade biológica de uma proteína devido à ruptura das interações intermoleculares que permitem seu enovelamento, mantendo-a na forma nativa.  Os principais agentes desnaturantes são: temperatura, pH, adição de solventes orgânicos.