A Embriologia

O sistema CRISPR/Cas9 do tipo II éum mecanismo de defesadas bactérias e Archaea contra elementos genéticos invasores como fagos e plasmídeos de DNA. Amemóriaimunitária surge após o DNA sercortado em pequenos fragmentose incorporado no CRISPR locus, passando a designar-se porprotoespaçador. O locusé transcrito numacadeia percursora de RNA não codificante (pre-crRNA), As cadeias repetidas do pre-crRNAsofrem hibridaçãocom um segundo RNA não codificante,otrans-activating CRISPR RNA(tracrRNA), formando uma cadeia dupla de RNA que é clivada e processada pela host factor ribonuclease(RNase) III. A forma duplex decrRNA-tracrRNA associa-secom a nucleaseCas9e forma umcomplexo responsável pelo reconhecimento e destruição do DNA invasor in vitro e nas células procariotas.Esta estrutura formada, quepossui o crRNA com o espaçador, tem especificidade para uma sequência alvo,ligando-sepor complementaridade e arrastando consigo a nuclease Cas9. O seu domínio HNH clivaa cadeia complementar e o domínio RuvC a cadeia não complementar, provocando um duplo corte na dupla cadeia de DNA. Tal só acontece caso a sequência alvose encontre na região adjacente a uma pequena sequência conhecida como protospacer adjacent motif.

A DSB será processada por 2 mecanismos de reparação de DNA: a recombinação homóloga (HDR) e a recombinação não homóloga (NHEJ). De um modo geral a recombinação não homóloga (NHEJ) é mais ativaque a homóloga (HDR), devido a não necessitar de nenhummolde de DNA sendoo mecanismo usado preferencialmente durante a fase S e G2 do ciclo celular (HEYER et al, 2010; XUEet al., 2015). Contudo, é mais propensa a erros atravésde pequenas inserções ou deleções genéticas. Estas mutações frameshiftpodem levar a alteração da função do gene alvo. Já a recombinação homóloga (HDR) é mais precisa uma vez que necessita da presença de uma sequênciamolde sintética corretiva para proceder à reparação, diminuindooerro. (BIBIKOVA et al., 2002; HEYER et al, 2010; SAVIC e SCHWANK, 2015)(Figura 3).Estestiposde mecanismosde reparação de DNA estão na base dos processos de edição genética dependente de nucleases programáveis