Anemia Da Doença Cronica

O que é um Antibiograma?

Antibiograma é um exame cuja finalidade é verificar quais são os antibióticos mais indicados para o tratamento da infecção causada pela bactéria isolada no material clínico analisado.

Por este teste ficamos sabendo a quais antibióticos a bactéria é sensível e a quais antibióticos a bactéria é resistente.

Métodos de determinação de susceptibilidade de bactérias aos agentes antimicrobianos - Antibiograma

Conteúdo

• Objetivos

• Introdução

• Material

• Execução

• Leitura e interpretação

• Resultados

OBJETIVOS

Após a realização desta prática, você deverá estar apto a determinar o perfil de susceptibilidade de cocos Gram-positivos (Staphylococcus) a diferentes antibióticos em meio sólido, além de detectar a presença de mutantes naturalmente resistentes à ação dos antibióticos.

INTRODUÇÃO

O conceito de que grande parte das bactérias relevantes do ponto de vista clínico é resistente a agentes antimicrobianos é de extrema importância para a abordagem do quadro clínico que causam. Faz-se necessário, portanto, a avaliação do perfil de susceptibilidade das bactérias isoladas a drogas antimicrobianas (antibiograma), mesmo que se realize uma escolha empírica em um primeiro momento. Caso não seja possível colher a amostra previamente ao início do tratamento com, deve-se suspender o (s) antibiótico(s) por pelo menos uma semana para se proceder ao antibiograma.

Dispõe-se, hoje, de uma gama de métodos que objetivam a avaliação do perfil bacteriano de susceptibilidade a drogas. O método da difusão em Agar (Kirby-Bawer) avalia diretamente a atividade antimicrobiana sobre determinada amostra. Trata-se de um método clássico, bastante empregado, que se baseia no fato de que antimicrobianos impregnados em discos de papel de filtro difundem-se no ágar, criando, em torno do disco, um gradiente decrescente de concentração da droga. O teste permite classificar as bactérias como sensíveis, com sensibilidade intermediária ou resistentes aos antimicrobianos. Na aplicação desse método usam-se critérios bacteriológicos precisos para o isolamento, obtenção do inóculo e semadura dos microrganismos, bem como um número variável de discos estabelecidos em função da espécie microbiana e da infecção ou doença que provoca. Assim, visando a confiabilidade do método, deve-se atentar para os seguintes fatores interferentes: tipo de meio de cultura, inóculo, conservação dos discos de antibiótico, condições de incubação (atmosfera de O2, temperatura e tempo), observação examinador dependente (deve-se ser detalhista na procura de mutantes).

Apesar de os resultados laboratoriais apenas indicarem qual será a atividade clínica da droga, seu efeito in vivo depende de sua capacidade de atingir o local de infecção em uma dose alta o suficiente para inibir o patógeno, da natureza do processo patológico e da resposta imune do hospedeiro. O antibiograma informa que a bactéria em questão é sensível ou não ao antibiótico que foi escolhido, norteando sua manutenção ou a mudança de estratégia terapêutica. Essa informação, portanto, não garante, mas aumenta consideravelmente as chances de sucesso do tratamento. Em última análise, cabe ao clínico realizar a escolha baseando-se em seu conhecimento dos fatos pertinentes ao caso em particular, o qual será complementado pela informação do exame em questão.

MATERIAL

• Culturas de S. aureus, em caldo simples, previamente incubadas a 37°C por 2 horas

• Discos de antimicrobianos

• Placas de Ágar Mueller-Hinton

• Zaragatoas estéreis

• Pinça

EXECUÇÃO

• Marcar no fundo da placa de Mueller-Hinton o local onde serão colocados os discos de antibióticos, de forma a ficarem 1 cm da borda e equidistantes 2 cm aproximadamente;

• Com os devidos cuidados técnicos embeber a zaragatoa nas culturas, eliminando o excesso de líquido por compressão nas paredes do tubo;

• Espalhar os inóculos uniformemente na superfície de ágar, de maneira a cobrir toda superfície do meio;

• Com uma pinça flambada e resfriada, retirar um disco de antimicrobiano do frasco, abrir a placa perto do bico de Bunsen e colocar o disco no local previamente marcado, comprimindo-o ligeiramente para que fique aderido à superfície do meio;

• Fechar a placa;

• Repetir o procedimento para a colocação dos demais discos de antimicrobianos;

• Incubar a placa a 37° C por 24 horas.

LEITURA E INTERPRETAÇÃO

O antibiótico presente nos discos se difunde no meio de cultura sólido, atingindo concentrações decrescentes em torno do disco. A presença ou ausência de crescimento em torno dos discos é interpretada, respectivamente, como resistência ou susceptibilidade do microrganismo ao antibiótico. As colônias no halo de inibição de crescimento são de bactérias mutantes resistentes à ação do antibiótico. Esses mutantes existem normalmente na população bacteriana devido a mutações espontâneas e o seu aparecimento não é induzido, e sim favorecido, pela pressão seletiva.

Tendo tais informações em vista, deve-se observar o crescimento bacteriano, principalmente nas áreas ao redor dos discos de antimicrobianos, e medir o diâmetro dos halos de inibição do crescimento bacteriano, anotando os resultados no quadro que se segue. A interpretação dos dados é feita com o auxílio do quadro fornecido no final do roteiro desta prática, o qual expressa a zona de inibição em mm, levando em consideração a carga antibiótica dos discos, sua difusibilidade e peso molecular.

RESULTADOS

Antibiótico utilizado Zona de inibição

(mm) Susceptibilidade

(S, I ou R)

Ampicilina

Cloranfenicol

Norfloxacina