Bioquimica Farmaceutica

Extração de DNA de morango

Objetivos: Extrair a molécula de DNA através de precipitação salina.

Para a análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento.

O procedimento a seguir é utilizado para extrair grandes quantidades de DNA a partir de

morango. Protocolos similares são usados nas extrações de DNA de outras fontes, como

amostras de sangue e tecidos.

Material:

• 1 a 2 morangos (frescos ou congelados) Álcool etílico 95% gelado (-100C)

• Bastões de vidro 1 saco plástico bem espesso

• Papel de filtro e funil Tubos de ensaio

• Balança Proveta 10 mL

• Espátula Erlenmeyer 100 mL

• Gelo Detergente

• NaCl Becker

Solução de Extração: 0,18g de NaCl + 0,6 mL de detergente + 11 mL de água destilada

Procedimento 1:

1. Colocar 1 morango, previamente lavado e sem as sépalas, em um saco plástico

2. Esmagar o morango com o punho por, no mínimo, 2 minutos

3. Adicionar ao conteúdo do saco, 10 mL de solução de extração

4. Misturar tudo, apertando com as mãos, por 1 minuto

5. Derramar o extrato obtido em um funil, contendo papel de filtro

6. Deixar filtrar em um Becker e transferir para um tubo de ensaio, somente 1/6 do volume total

do tubo.

7. Derramar vagarosamente álcool gelado no tubo, até que o mesmo esteja cheio pela metade

8. Mergulhar o bastão de vidro dentro do tubo, no local onde a camada de álcool faz contato

com a camada de extrato.

9. Manter o tubo no nível dos olhos e observar a formação de fitas brancas finas de DNA, que

se formação na interface entre as duas camadas.

Questões:

1. Esquematize uma célula vegetal e localize o DNA extraído no presente experimento.

2. Explique qual das etapas do procedimento foi capaz de liberar o DNA para o tubo de ensaio.

3. Qual é o papel das histonas?

4. Qual o papel dos seguintes reagentes utilizados na técnica de extração de DNA: Detergente

(docecil (lauril) sulfato de sódio) e álcool gelado.

5. Qual é a informação obtida após leitura em 260nm?

6. O que é efeito hipocrômico? Por que ele foi conseguido após aquecimento?