Dna Tomate

Muitas pesquisas de Biologia Molecular começam com a extração de ácidos nucleicos. A lise celular

libera as moléculas em uma fase aquosa que é separada dos restos celulares por centrifugação. As

proteínas são removidas da fase aquosa por solventes orgânicos (fenol, clorofórmio). O DNA, que

permanece na fase aquosa, é precipitado com etanol e, posteriormente, purificado e suspendido

em um buffer adequado.

A existência de kits comerciais tem mudado a rotina de muitos laboratórios. Nos kits, os solventes

orgânicos são substituídos por filtros que retém o DNA, em condições de concentração salina

elevada. A eluição do DNA retido no filtro ocorre em baixa concentração salina.

A PRÁTICA NO LABORATÓRIO DE ENSINO

Por alguma razão que nos escapa, a extração de DNA é uma atividade que entusiasma a alguns e

decepciona a outros. Provavelmente, as diferenças de opinião tenham mais a ver com a

personalidade dos alunos e suas fantasias que com a atividade em si.

As etapas possíveis no laboratório de ensino são as seguintes:

1. Trituramento do tecido, para separar as células.

2. Lise das membranas celulares com detergente, em uma

solução salina, para liberar os ácidos nucleicos e as proteínas.

3. Digestão das proteínas por ação enzimática de proteases

(Opcional).

4. Precipitação com etanol gelado. O DNA é solúvel em álcool,

mas torna-se insolúvel na presença de sal (NaCl), porque o

sódio neutraliza a carga negativa dos grupos fosfatos. O etanol