EXTRAÇÃO DE DNA DA CEBOLA

Extração de DNA de cebola: isolando DNA na cozinha.

Objetivo: extrair DNA de cebola utilizando produtos de uso doméstico (detergente para lavar louça, sal de cozinha e álcool).

A extração de ácidos nucléicos (DNA e/ou RNA) geralmente é a primeira de várias etapas para o estudo da biologia molecular de qualquer organismo. Nesta aula, serão utilizados produtos de uso doméstico para a extração de DNA da cebola (Allium cepa), para demonstrar que procedimentos para extração de ácidos nucléicos são simples e podem ser executados mesmo em laboratórios sem infra-estrutura específica para este fim.

Referência: Loreto, E. L. S. & Sepel, L. M. N. Atividades experimentais e didáticas de Biologia Molecular e Celular. São Paulo, Editora da Sociedade Brasileira de Genética, 2002.

Material

• Uma cebola grande

• Ralador

• faca

• Sal de cozinha (NaCl)

• Detergente para lavar louça (líquido ou gel)

• Água quente (65°C a 80°C)

• Termômetro em coluna de mercúrio para verificar a temperatura da água

• Papel-filtro ou filtro de café

• Funil

• Gelo

• Álcool 96°GL gelado

• Três frascos de vidro - becker (~200ml)

• Bastão ou pipeta de vidro

• Recipiente (plástico ou isopor) para o banho de gelo

• Bico de bunsen

• Proveta

• Colher

Procedimento

1. Rale a cebola e coloque o material ralado em um becker.

2. Adicione 100 ml de uma solução feita (em um becker) com 80 ml de água quente (aquecida em bico de bunsen), 20 ml de detergente e uma colher de sopa de sal (NaCl). Misture bem a solução com a cebola ralada. Aguardar aproximadamente 10 min.

3. Coloque o frasco com a cebola ralada em um banho de gelo (recipiente com um pouco de água e gelo). À medida que a suspensão onde está a cebola ralada esfriar, deverá ser possível observar que o líquido parece estar “talhando” (formando grumos).

4. Quando a suspensão com a cebola ralada estiver fria, filtre-a e colete o líquido filtrado em um becker.

5. Incline o frasco de vidro com o líquido filtrado (ângulo de 30° a 40°) e derrame vagarosamente, pela parede lateral, o álcool gelado (de 10 a 15mL). Você verá que o álcool não se mistura prontamente com a solução filtrada, havendo a formação de duas fases (na superior fica o álcool). Entre as duas fases é possível observar a formação de um precipitado com aspecto de “fiapos” esbranquiçados, que são os ácidos nucléicos.

6. Com a ajuda do bastão ou da pipeta de vidro, é possível enrolar os ácidos nucléicos que estão precipitando, ou seja, você pode “pescar” o DNA da cebola.

7. Uma vez enrolados no bastão, os ácidos nucléicos devem secar