Método de imunotransferência

• Explique no que se baseia a técnica de immunoblotting?

O immunoblotting consiste em um ensaio imune enzimático que também é conhecido como western blotting. Inicialmente, utiliza-se a eletroforese em gel de acrilamida para separar as proteínas de acordo com o peso molecular que, posteriormente, são transferidas para uma membrana de nitrocelulose para o uso de anticorpos específicos à proteína de interesse. A membrana de nitrocelulose é incubada com o anticorpo primário que se liga à proteína que se pretende detectar, formando um complexo anticorpo-proteína. Seguidamente, é adicionado o anticorpo secundário conjugado, anticorpo-enzima, que se vai ligar ao anticorpo primário. A enzima funciona como um sinalizador molecular que permite a visualização do local da proteína detectada.

• Explique a diferença na utilização das técnicas de RT-PCR, hibridização “in situ” e Western Blotting para a detecção de proteínas mutantes.

• Explique o processo de síntese e transporte de neurotransmissores em um neurônio

Sua síntese acontece no terminal do axônio a partir de precursores metabólicos existentes no local. As enzimas relacionadas na síntese de tais neurotransmissores são fabricadas no corpo celular das células nervosas e encaminhadas até o terminal neuronal. Seu transporte acontece nas membranas pré e pós-sinápticas na fenda sináptica. A passagem do impulso nervoso nessa região é feita por substâncias químicas os neurotransmissores, liberados na fenda sináptica. O terminal axonal contém vesículas membranosas esféricas que armazenam neurotransmissores - as vesículas sinápticas. A membrana dendrítica relacionada com as sinapses (pós-sináptica) apresenta moléculas de proteínas especializadas na detecção dos neurotransmissores na fenda sináptica - os receptores. Por isso, a transmissão do impulso nervoso ocorre sempre do axônio de um neurônio para o dendrito ou corpo celular do neurônio seguinte. Então nas sinapses químicas, a informação que viaja na forma de impulsos elétricos ao longo de um axônio é convertida, no terminal axonal, em um sinal químico que atravessa a fenda sináptica. Na membrana pós-sináptica, este sinal químico é convertido novamente em sinal elétrico. Como o citoplasma dos axônios, inclusive do terminal axonal, não possui ribossomos, necessários à síntese de proteínas, as proteínas axonais são sintetizadas no soma (corpo celular), empacotadas em vesículas membranosas e transportadas até o axônio pela ação de uma proteína chamada cinesina, a qual se desloca sobre os microtúbulos, com gasto de ATP. Esse transporte ao longo do axônio é denominado transporte axoplasmático e, como a cinesina só desloca material do soma para o terminal, todo movimento de material neste sentido é chamado de transporte anterógrado. Além do transporte anterógrado, há um mecanismo para o deslocamento de material no axônio no sentido oposto, indo do terminal para o soma.

• Explique os processos de reciclagem de neurotransmissores

Existe um complexo que se chama cinesina que é responsável por levar a vesícula até o botão terminal. O organismo possui um processo de reciclagem por meio de um complexo chamado dineína, que retorna com a vesícula vazia até o axônio.

• Explique

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