Relatório Técnico De Aula Prática

1. Objetivo

Analisar, observar e registrar o comportamento das amostras por via do método de extração do pigmento betacianina, por diversidade de solventes, a variação da permeabilidade da membrana plasmática e fazer-se de uma relação entre os fenômenos observados e as exposições teóricas da disciplina de Biologia Celular referentes às membranas plasmáticas e suas propriedades.

2. Introdução

Uma das condições mais importantes para a manutenção da vida em nível celular é a manutenção da diferença de gradientes iônicos entre os meios intra e extracelular. Além disso, moléculas essenciais ao funcionamento da célula, como a glicose e aminoácidos, precisam frequentemente ser transportadas ativamente para o interior da célula. Daí resulta a necessidade de haver um mecanismo de permeabilidade seletiva na membrana plasmática, através do qual a célula e suas organelas possam estabelecer certo grau de controle sobre fatores como Ph e concentração de certas substâncias necessárias ao funcionamento apropriado do metabolismo.

Entre os mecanismos mais importantes de transporte de substância através da membrana, é importante mencionar difusão, osmose, transporte ativo mediado por proteínas e endocitose (Coelho e Moreira, 2001).

O transporte por difusão consiste na abertura da parece celular para o transporte passivo de substâncias por pressão osmótica. O processo é passivo porque

“A difusão é um processo espontâneo que aumenta a desordem ou entropia (…). Se existir um gradiente de concentração no sistema, o movimento individual dos solutos causa um movimento orientado dos locais de maior concentração para os de menor concentração até ser atingido um estado de equilíbrio em que a distribuição de soluto é uniforme” (Coelho e Moreira, 2001)

Dessa forma, um importante fator no transporte de substâncias na difusão é a diferença de gradiente de concentração das substâncias. A estrutura da membrana plasmática, no entanto, apresenta permeabilidade diferenciada dependendo da polaridade da molécula que a cruza. Moléculas apolares, como oxigênio e dióxido de carbono, atravessam a membrana com facilidade devido ao caráter anfipático da bicamada fosfolipídica. Em contato com a membrana, substâncias apolares aumentam a sua permeabilidade, passando facilmente por ela. De um modo geral, o transporte de substâncias polares para o interior é feito por meio de canais iônicos e o transporte não acontece por difusão a não ser que se trate de uma molécula razoavelmente pequena, como ureia, glicerol ou água. Especialmente no caso da água, há ainda a presença de canais aquaporinos que aumentam a permeabilidade à água em dez vezes quando comparada a membranas artificiais (Coelho e Moreira, 2001) Apesar do transporte rápido de moléculas polares pequenas, essas não afetam a permeabilidade da membrana.

Conforme a variação na permeabilidade da membrana varia pela presença de substâncias apolares, aumentam também a difusão de qualquer substância interna da celula que tenha diferença de gradiente. No caso do presente trabalho, a diferença ocorreu na concentração dos pigmentos dos cromoplastos de pequenos fragmentos de beterraba.

Considerando essas propriedades da membrana e da beterraba, foi proposta uma atividade prática ilustrativa desses conceitos em que se buscou avaliar a variação da permeabilidade da para a oitava turma de biotecnologia da UFSCAR – Campus de Araras. O trabalho, portanto, foi realizado partindo da premissa de que a beterraba liberaria pigmento na presença de substâncias apolares, devido ao aumento de sua permeabilidade. Além disso, também se propôs a construção de uma estrutura similar à membrana com isopor e massa de modelar colorida, com o objetivo de ilustrar a presença de diversas estruturas complexas nas membranas.

3. Material e Metodologia

3.1 Materiais e utensílios

-01 beterraba

-Estilete ou faca

-06 tubos de ensaio

-Béqueres

-Pipeta graduada

-Pipeta de Pasteur

-Pêra de borracha

-Pinça

-Papel filtro

-Suporte para tubos

-Caneta para escrever em vidro

-Água destilada, acetona, álcool, aguarrás, detergente e NaCl 0,85%

3.2 Metodologia

Inicialmente foi realizado o corte de uma beterraba em pequenos cubos e estes foram mergulhados em solução de NaCl 0,85%. Após, identificou-se os tubos de ensaio com os utilizando de caneta para vidraria e em cada um destes fora adicionado diferentes quantidade e tipos de reagentes, com ajuda de pipeta graduada acoplada a pêra de borracha e béqueres. Respectivamente foram adicionados em cada tubo: 5 mL de água destilada, 5 mL de água destilada e uma gota de detergente (auxílio de pipeta de Pasteur), 5 mL de acetona, 5 mL de álcool, 5 mL de aguarrás, e no último, 2,5 mL de água destilada e 2,5 mL aguarrás. Em seguida foram adicionados os cubos de beterraba, um para cada tubo, sendo retirados da solução de NaCl com auxílio de pinça e colocados em papel filtro para secagem. Posteriormente os tubos foram deixados em repouso, agindo por 10 minutos.Após passados os 10 minutos, eles foram levemente agitados e deixados em repouso por mais 30 minutos. Deste modo foi feita a observação dos resultados e os mesmos foram fotografados.

4. Resultados

Seguem abaixo os resultados do experimento de extração de betacianina da beterraba para o estudo da permeabilidade da membrana plasmática ilustrados a partir de fotos dos tubos finais.

O tubo de número 1, que continha água destilada apresentou pouca coloração, pois a beterraba liberou pequena quantidade de pigmento. O tubo de número 2 que continha água destilada com uma gota de detergente apresentou coloração rosada, pois a beterraba liberou maior quantidade de betacianina. O tubo de número 3 que continha acetona, apresentou coloração avermelhada, porém esbranquiçada, indicando alguma reação adversa a reação desejada.

O tubo de número 4 que continha álcool apresentou coloração avermelhada 3 o tubo 5, que continha aguarrás, apresentou-se incolor,indicando que a beterraba não liberou a betacianina. O tubo 6 que continha água e aguarrás