Relatório extração RNA

Nomes: Rafael Neves Brondani, Luiz Henrique Missio, Gabriel Bissacot

Módulo: Morfofisioquímica

Professora: Adriane Pozzobon

Laboratório: Biomolecular

Data da prática: 24/03

Relatório extração RNA

Introdução:

O RNA é um ácido nucleico de fita simples composto por fosfatos, açúcares (pentoses) e  bases nitrogenadas (uracila, adenina, guanina e citosina).

O RNA se diferencia em alguns aspectos do DNA, como:

	DNA	RNA
Fita	Dupla	Simples
Bases nitrogenadas	A,T,C,G	A,U,C,G
Açucar	Desoxirribose	Ribose
OH no C 2’	Ausente	Presente

 

O RNA possui 3 subtipos:

-RNA Ribossômico: constituem os ribossomos e são o tipo mais abundante

-RNA Mensageiro: apresenta a informação a ser transcrita

-RNA Transportador: leva a mensagem de qual aminoácido deverá ser produzido

Para que extrair o RNA de uma célula ?

-Para sabermos se um gene será expresso

-Entretanto, saber da possibilidade de um gene ser sintetizado não é certeza de ele ter ser expresso e ter plena funcionalidade

Quais as vantagens/desvantagens de trabalhar com RNA se comparado ao DNA?

-A principal desvantagem de trabalhar com o RNA ao invés do DNA é que o RNA é muito mais instável, e por consequência disso, mais reativo que o DNA. Com isso, é necessário um cuidado muito maior na técnica de extração do RNA em comparação ao DNA. Essa instabilidade se deve a presença de um OH no carbono 2 da pentose. Além disso, a amostra de RNA extraída tem um duração muito inferior que a de DNA.

- A principal vantagem de trabalhar com RNA é que  na amostra extraída de RNA há somente “éxons” (que é a parte codificante) e no DNA há “éxons” e “introns” (que é a parte que não codificante ). Apesar de os “íntros” serem muito importantes para a vida, para a técnica extração, eles não são bem vindos.

Principais diferenças entre as técnicas de extração do DNA e do RNA:

-A maior instabilidade do RNA em relação ao DNA faz com a técnica de exatração do RNA precise ser feita com muito mais cuidado. Deve-se ter um cuidado maior com o pellet pela sua fragilidade e facilidade de desprender do tubo. Além disso, a retirada do etanol do tubo deve ser feita com muita cautela, sendo feita com a ajuda de um cotonete. Além do mais, a retirada do RNA deve ser feita de tecidos vivos.

Objetivo da aula:

Conhecer a técnica de extrair RNA a partir de tecidos vivos ( que nesse caso, foi do fígado)

Resultados e discussão:

Homogeneização do tecido:

- Adiciona-se Trizol ao tubo eppendorf (onde está o tecido)  e mexe a mistura no vórtex

-Após isso a amostra é transferida para outro tubo.

Separação:

 Deixamos a amostra em repouso por 5 minutos e em seguida adicionamos clorofórmio e levamos ao vórtex por 15s, com o objetivo de separar a fase aquosa (onde está o DNA) da fase orgânica. Após isso a mistura é levada á centrífuga onde efetivamente a fase aquosa é separada da orgânica. Com essa separação  há a formação do pellet no fundo do recipiente.