Relatório de Enzimas

FUNDAÇÃO UNIVERSIDADE REGIONAL DE BLUMENAU – FURB

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE MEDICINA VETERINÁRIA

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE ENZIMAS

AMÁBILE DELL ANTÔNIO

BRUNA CAROLINE LEBER SCHRÖR

ELLEN BRUNA DA SILVA

KARINA BEHNKE

SHERON DOS SANTOS

BLUMENAU, 07∕04∕2016

AMÁBILE DELL ANTÔNIO

BRUNA CAROLINE LEBER SCHRÖR

ELLEN BRUNA DA SILVA

KARINA BEHNKE

SHERON DOS SANTOS

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA DE ENZIMAS

Relatório apresentado ao curso de graduação em Medicina Veterinária da Universidade Regional de Blumenau – FURB como requisito parcial para obtenção de nota na disciplina de Bioquímica Geral.

Professora: Caroline Valente

BLUMENAU, 07∕04∕2016

SUMÁRIO

1 - INTRODUÇÃO        3

2 - OBJETIVOS        3

3 - MATERIAIS E MÉTODOS        4

3.1 – REAGENTES:        4

3.2 – MATERIAIS:        4

3.3 – PROCEDIMENTOS:        4

4 - RESULTADOS E DISCUSSÃO        5

5 – CONCLUSÕES        6

6 – BIBLIOGRAFIA        6

1 - INTRODUÇÃO

        As enzimas são catalisadores biológicos que aceleram as reações químicas dos seres vivos, pela diminuição da energia de ativação, isto é, diminuição da energia necessária para a realização das reações químicas. Como conseqüência, as reações que ocorrem no interior dos organismos não necessitam de altas temperaturas para ocorrer. As enzimas possuem um alto grau de especificidade, que se dá devido a uma região particular na superfície da enzima, chamada de sítio de ligação ao substrato, que é formulado especialmente para ligar um substrato específico.

        A cinética enzimática estuda a velocidade das reações enzimáticas, ou seja, a velocidade de transformação de subprodutos em produtos, que pode ser expressa da seguinte maneira:

Enzima + Substrato ↔ Enzima Substrato ↔ Enzima Produto ↔ Enzima + Produto

        A interação entre a enzima e o substrato é dada pela velocidade inicial de uma reação, que no caso, depende da concentração do substrato. Quando a concentração do substrato aumenta, a velocidade inicial aumenta até a enzima estar completamente saturada (Vmáx). Através da Vmáx, podemos descobrir a afinidade da enzima pelo substrato (Km), que é igual a concentração de substrato na qual 50% dos sítios ativos estão ocupados, ou seja, quanto menor for o Km, maior é a afinidade da enzima pelo substrato.        

        A velocidade de uma reação enzimática pode ser medida ou pela quantidade de substrato transformado ou pela quantidade de produto formado por unidade de tempo e por unidade de volume. A relação entre a concentração do substrato e a velocidade da reação enzimática pode ser mostrada graficamente colocando a concentração de substrato no eixo X e a velocidade da reação no eixo Y.

2 - OBJETIVOS

        Determinar o valor do Km, da enzima invertase com o substrato sacarose, através da Vmáx obtida pelo gráfico da concentração do substrato.

3 - MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 – REAGENTES:

• Enzima invertase (0,1 mg proteína∕mL);
• Tampão acetato 0,05 M; pH 4,7
• Solução de sacarose 0,01M; 0,02M; 0,05M; 0,1M; 0,2M; 0,3M e 0,4M;
• 3,5-dinitro-salicilato (solução alcalina);
• Água destilada;

3.2 – MATERIAIS:

• Pipeta automática;
• Becker;
• Estante;
• Tubo de ensaio;
• Fotocolorímetro;
• Agitador;

3.3 – PROCEDIMENTOS:

         Montar uma série de tubos conforme os dados da tabela abaixo:

Reativos	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3	Tubo 4	Tubo 5	Tubo 6	Tubo 7	Tubo 8
Tampão	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml
Água	1,3 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,3 ml	0,3 ml
Sacarose 0,01M		1,0 ml
Sacarose 0,02M			1,0 ml
Sacarose 0,05M				1,0 ml
Sacarose 0,1M					1,0 ml
Sacarose 0,2M						1,0 ml
Sacarose 0,3M							1,0 ml
Sacarose 0,4M								1,0 ml
Enzima invertase	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml	0,2 ml
Agitar e incubar a 25ºC por 5 minutos
3,5-dinitro-salicilato	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml
Agitar e aquecer a 100ºC por 5 minutos
Água	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml	4,0 ml

4 - RESULTADOS E DISCUSSÃO

        Através das absorbâncias obtidas pelo fotocolorímetro, conseguimos montar o gráfico abaixo:

[pic 1]

Observação: A unidade de medida da sacarose é mM e na imagem acima está errada.

Através do gráfico podemos observar que a enzima está completamente saturada no ponto de 0,35 absorbâncias. Com a Vmáx determinada, conseguimos achar o valor de Km que é aproximadamente 24mM de sacarose.