Técnica Laboratorial de Avaliação da Urease no Solo

UREASE

Após a adição de uma solução aquosa ou uma solução tamponada com ureia, Princípio solo As amostras são incubadas durante 2 h a 37 ° C. amónio liberado éextraiu-se com solução de cloreto de potássio, e determinada por um

reacção Berthelot  (reação em que se verifica que uma solução de fenol amoniacal tratada com hipoclorito de sódio fica com uma forte cor azul) modificados.

A determinação é baseada na

reacção de salicilato de sódio com NH3 na presença de sódio

dicloroisocianurato que forma um complexo de cor verde sob

condições de pH alcalino. O nitroprussiato de sódio é usado como um catalisador,

e aumenta a sensibilidade do método de cerca de dez vezes.

1

• tampão de borato (O.lM, pH 10)

Dissolver 57,2 g de dis tetraborate ódio em 1500ml de água destilada

água. Quente, se necessário, para obter a solução completa. resfriar o

solução até à temperatura ambiente, ajustar o pH com NaOH 3M para pH

10, e dilui-se o volume para 2000 mL com água destilada numa

balão volumétrico. Este tampão é necessário apenas para o buffer

Método.

2

• Solução de substrato para o método sem buffer (79.9mM)

Dissolve-se 2,4 g de ureia em água destilada, e diluir para o volume

500 ml com água destilada num frasco volumétrico. Preparar esta reagente

diariamente.

3

• Solução de substrato para o método tamponada (NOMM)

Dissolve-se 21,6 g de ureia em água destilada e dilui-se o volume para

500 ml com água destilada num frasco volumétrico. Preparar esta reagente

diariamente.

4

• solução de cloreto de potássio (2 M)

Dissolver 74.6g da KCI em água destilada, adicione 10 ml de 1M HCI

e dilui-se o volume a 1000 ml com água destilada num volumétrica

Garrafa. Conservar a solução não mais que algumas semanas.

5

• solução de NaOH (0,3M)

Dissolve-se 12 g de NaOH em água destilada e dilui-se o volume

para 1000 ml com água destilada num frasco volumétrico.

6

• solução de salicilato de sódio (1.06M)

Dissolve-se 17 g de sódio e 120 mg de salicilato de sodiumnitroprusside

em água destilada e dilui-se o volume para 100 ml com

água destilada num frasco volumétrico. Preparar esta solução imediatamente

antes de usar.

7

• solução de dicloroisocianurato de sódio (39,1 mM)

Dissolve-se 0,1 g de sódio, dicloroisocianurato de água destilada,

e dilui-se o volume para 100 ml com água destilada num volumétrica

Garrafa. Preparar esta reagente diária.

8

• solução estoque padrão (lOOOflgNH / N · ml-1)

Dissolve-se 3,8207 g de NH4CI em água destilada e dilui-se a

volume para 1000rnl com água destilada num frasco volumétrico. Loja

a solução a 4 ° C.

9

• Os padrões de calibração

Pipeta 0 (reagente em branco), 1, 1.5,2 e 2,5 ml do estoque padrão

solução em 100 ml balões volumétricos, e diluir para o volume

100 ml com solução de cloreto de potássio. Os padrões de calibração

contém 0, 10, 15, 20 e 25 flg NH / N. ml-l.

Procedimento Método Unbuffered

Pesar 5 g de solo de campo úmido em três 100 ml Erlenmeyers.

Adicionar gota a gota 2,5 ml de solução de substrato para o método não tamponada

para dois frascos de amostras (2,5 ml), pipeta de água destilada para o

balão residual (controle). Tapar e incubar os frascos durante 2 horas a

37 ° C.

Após a incubação, adicionar 2,5 Rnl de solução de substrato para o não tamponada

método para controlos e 2,5 ml de água destilada para amostras.

Adicionar 50 ml de solução de cloreto de potássio para ambas as amostras e controlos,

e agitar durante 30 min num agitador rotativo. Filtrar o conteúdo

os frascos através de filtros de dobradas.

Analise fotométrica 

Para a análise fotométrica, pipeta 1 ml de filtrado, 9 de Rnl destilada

água, 5 ml de reagente A e 2rnl de solução de dichlorisocyanurate

em um tubo de ensaio, misture bem e deixe repousar por 30 minutos na sala

temperatura.

Para preparar a curva de calibração, tratá 1 Rnl de padrão de calibração