Ação de Diferentes pH’s sobre a atividade da peroxidase

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA:

Ação de diferentes pH’s sobre a atividade da peroxidase.

Goiânia – GO

2015

RESUMO

As enzimas sofrem consequências estruturais quando submetidas à variação de pH, especialmente quando a mudança é extrema devido a repulsão de cargas e quando a variação é pequena devido a dissociação. Algumas mudanças no pH não comprometem a estrutura da enzima mas reduz sua atividade por afetar o sítio catalítico. Neste relatório foi verificada a variação da atividade enzimática (peroxidase) para cada pH. As enzimas atingem atividade máxima quando em pH ótimo o qual normalmente é igual ao do ambiente em que a enzima é encontrada. A maior atividade enzimática foi em pH 3 e a menor entre 4 e 6. Foi considerado um possível erro na leitura da absorbância pelo equipamento o que justifica os dados negativos encontrados.

Palavras-chave: enzima, peroxidase, pH.

1. OBJETIVOS

Verificar a ação do pH sobre a atividade da enzima (peroxidase).

1. MATERIAIS E MÉTODOS

1. Materiais

• Solução tampão Citrato-Fosfato 0,1M(pH – 5,0 – 3,0 – 4,0 - 6,0)
• Extrato enzimático;
• H2O2 3% (água oxigenada);
• Água (H2O);
• Guarnicol;
• Metabisulfito de sódio;
• Banho Maria (50 ºC);
• Espectrofotômetro;
• 5 Tubos de ensaio;
• Ernlenmayer;
• Pera;
• Pipeta volumétrica;  

1. Procedimento

Para o preparo das amostras utilizou 5 tubos de ensaio adicionando as seguintes soluções, seguindo a ordem da tabela.  

Tabela 1 –Procedimento para preparo das amostras.

Tubo	Tampão Citrato-Fosfato 0,1M	Ext. Enzima	H2O	H2O2 (3%)	Guarnicol	HOMOGENEIZAR
Branco	2 mL pH 5,0	0	1 mL	0,5 mL	0,5 mL
1	2 mL pH 3,0	1 mL	0	0,5 mL	0,5 mL
2	2 mL pH 4,0	1 mL	0	0,5 mL	0,5 mL
3	2 mL pH 5,0	1 mL	0	0,5 mL	0,5 mL
4	2 mL pH 6,0	1 mL	0	0,5 mL	0,5 mL

Após as amostra serem homogeneizadas foram levadas ao banho maria a 50 ºC por cinco minutos. Em seguida foi adicionado 1 mL de metabisulfito de sódio em cada tubo e levados para realizar a leitura no espectrofotômetro a 470 nm.

1. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A Tabela 1 apresenta os valores tomados do espectrofotômetro para absorbância.

Tabela 1 – Valores da absorbância para cada amostra.

Amostra	Absorbância
Branco	1
1	0,052
2	0,125
3	0,156
4	0,172

Na Tabela 2, a seguir, estão dispostos os valores obtidos dos cálculos para valor real da leitura, atividade da enzima/minuto, atividade da enzima/grama/minuto, atividade da enzima/μmol/grama/minuto e pH.

Tabela 2 – Valores obtidos para a atividade da enzima.

Amostra	Valor real da leitura	Ativ. da enzima/min	Ativ. da enzima/g/min	Ativ. da enzima/ μmol/g/min	pH
1	-0,948	-0,1896	-0,474	-474	3
2	-0,875	-0,175	-0,4375	-437,5	4
3	-0,844	-0,1688	-0,422	-422	5
4	-0,828	-0,1656	-0,414	-414	6