Determinação da Atividade da Fosfatase Alcalina

UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA[pic 1][pic 2]

CENTRO DE CIÊNCIAS AGROVETERINÁRIAS-CAV

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA AMBIENTAL

Iago Bernardi Winter

Arthur Mello

Ana Caroline Cantarelli

Felipe Guesser

Determinação da Atividade da Fosfatase Alcalina

LAGES, SC

2015

Introdução[pic 3][pic 4]

A fosfatase alcalina é uma enzima presente nas membranas de revestimento dos canalículos biliares (canalicular). Tem como uma de suas funções remover grupos fosfato de um grande número de moléculas diferentes, incluindo proteínas, nucleotídeos e alcalóides; como o próprio nome sugere, essa enzima é mais ativa em soluções alcalinas. O processo de remoção desses grupos fosfatos é conhecido como desfosforilação.

Nesta prática foi realizada a determinação da atividade da fosfatase alcalina, para realização desta análise foi utilizado um método com a adição de chumbo e minhocas em diferentes amostras do mesmo solo e feito a análise no Espectofotômetro, aí então foram feito cálculos para se obter o resultado da atividade da fosfatase alcalina.

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Materiais e Métodos

• Materiais:

• Vasilha de plástico
• Pipeta
• Becker
• Pera
• Minhocas
• Solo
• Reagentes
• Cobre
• Espectrofotômetro
• Solução tampão

• Métodos:

• Para a determinação da atividade da fosfatase alcalina foram primeiramente separados cinco potes de plásticos, e posteriormente foi feita a diluição com 5 ml de água em todos os béqueres, mais uma “colher” de solo,adicionando-se também minhocas em cada vasilha. Depois foi adicionado cobre e após uma semana houve a coleta do solo, o qual foi diluído em uma solução tampão e foi utilizado para descobrir a absorbância que é medida fotometricamente pelo espectrofotômetro numa leitura de 405nm.

 Resultados e Discussões

Foram colocadas:

- Pote de controle: três minhocas;

- Pote 1: cinco minhocas;

- Pote 2: oito minhocas;

- Pote 3: sete minhocas;

- Pote 4:  duas minhocas.

                Após uma semana, relatamos a seguinte situação:

- Pote de controle: uma minhoca viva;

- Pote 1: cinco minhocas vivas;

- Pote 2: oito minhocas vivas;

- Pote 3: sete minhocas vivas;

- Pote 4: duas minhocas vivas.

Para o cálculo da determinação da atividade da fosfatase alcalina, foram realizadas as seguintes etapas:

   Primeiro, com os resultados obtidos no Espectofotômetro, calculamos as médias dos três valores, assim:

	T0/LI	T1	T2	T3
CONTROLE	0,922	0,927	0,918	0,918
1	0,841	0,841	0,848	0,845
2	0,850	0,851	0,850	0,849
3	0,856	0,857	0,855	0,856
4	0,857	0,857	0,857	0,855

Após, realizamos as seguintes operações para o controle e todos os potes, assim:

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