PROTOCOLO DE COLORAÇÃO DE GRAM

UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS

FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS

CURSO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

PROTOCOLO DE COLORAÇÃO DE GRAM

Discente: Adria Velloso – 21353055

Docente: Antônia Souza

Disciplina: Microbiologia Geral

MANAUS-AM

A técnica de coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), em 1884, o qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos. O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes: cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica.

Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são descoradas. A parede celular das bactérias gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade é reduzida e o complexo CVI não pode ser extraído.

Outra explicação baseia-se também em diferenças de permeabilidade entre os dois grupos de bactérias. Nas Gram-positivas, o complexo CVI é retido na parede após tratamento pelo álcool-acetona, o que causa, provavelmente, uma diminuição do diâmetro dos poros da camada de glicopeptídeo ou peptideoglicano da parede celular. A parede das bactérias Gram-negativas permanece com porosidade suficientemente grande, mesmo depois do tratamento com álcool acetona, possibilitando a extração do complexo CV-l.

INTRODUÇÃO:

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.

OBJETIVO: Caracterizar conforme a cor as amostras de bactérias.

MATERIAIS E REAGENTES:

Lâmina de vidro;

Alça de platina;

Pinça;

Água destilada;

Cristal Violeta;

Lugol;

Álcool 95;

Succina.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL:

1º Limpou-se a bancada, fez-se a assepsia da lâmina e a identificou;

2º Colocou-se uma gota de água destilada estéril na sobre uma lâmina limpa;

3º Retirou-se com a ajuda de uma alça de platina uma