Relatório Identificação de Aminoácidos e Proteínas e Precipitação de Proteínas

Introdução

É de grande obviedade afirmar que as proteínas são vitais para o ser humano logo que, levando em consideração que são o grupo mais abundante de macromoléculas, possuem presença em todas as células, tanto dentro quanto fora delas. Além disso, possuem um imenso número de funções e controlam quase todos os processos celulares (NELSON; COX, 2014).

Embora existam inúmeras proteínas com diferentes funções, todas são feitas de polímeros de aminoácidos. Ademais, mesmo sendo eles apenas 20, acabam formando milhares de proteínas por estarem embaralhados em conformações diferentes, considerando-se que as proteínas costumam ser formadas por mais de 100 aminoácidos (MARZZOCO; TORRES, 1999).

Segundo Marzzoco e Torres (1999), os aminoácidos possuem um grupamento amina (-NH₂) e um grupamento ácido carboxílico (-COOH). Entretanto, apresenta a prolina como sua única exceção por possuir um grupamento -NH- no lugar do -NH₂. Além disso, os aminoácidos possuem um carbono quiral em seu centro ao qual os dois grupos se ligam, juntamente com um átomo H e um radical que varia, sendo o último o que traz as funções para cada aminoácido. Porém, seguindo De Souza e Neves (2022) e Nelson e Cox (2014), os aminoácidos se ligam por meio de ligações peptídicas, onde o grupo amino se liga com o grupo carboxílico de outro aminoácido, liberando uma molécula de água. A FOOD INGREDIENTS BRASIL (2014) relatou também que o radical e a ordem na qual os aminoácidos estão ligados no polímero que forma a proteína também são de grande importância, pois é esse fator que dá à elas suas funções e propriedades.

Tratando-se do entendimento deste relatório, serão importantes, também, os conceitos de reativo de Biureto, reativo de Ninidrina, reação de Sakaguchi e ponto isoelétrico. Sendo o primeiro, de acordo com Camargo, Pecci e Postigo (2017), o teste que utiliza o Biureto, um reagente identificador de proteínas e responsável por alterar a cor da solução para violeta quando em contato com fluidos ricos em proteínas. Porém, segundo De Souza e Neves (2022), a fim de ocorrer tal fenômeno, é necessário estar em meio alcalino e conter sulfato de cobre (CuSO4).

Já o reativo de Ninidrina, relaciona-se com a reação que ocorre ao aquecer soluções com excesso de Ninidrina adicionado. Se for formado um produto na cor púrpura, conclui-se que há presença de grupamento amino livre presente em aminoácidos. Entretanto, há duas exceção: a prolina e a hidroxiprolina, que fazem com que a solução fique amarela ao fim da reação. Tal coloração amarelada ocorre por conta destas possuírem um átomo de nitrogênio dentro de um anel e, logo, não sendo livre para fazer ligação com o reagente (DE SOUZA; NEVES, 2022).

A reação de Sakaguchi, por sua vez, trata-se da identificação da presença de arginina nas proteínas, onde o produto se torna vermelho quando positivado (HEUSER, 1990).

Por fim, o conceito de ponto isoelétrico (PI) refere-se ao ponto em que as cargas positivas e negativas se igualam, fazendo com que a solubilidade atinja seu menor ponto possível (FOOD INGREDIENTS BRASIL, 2014). Com a diminuição da solubilidade, as proteínas tendem a se precipitar, ou seja, formar agregados. Além disso, esse ponto é encontrado em um pH específico em cada proteína, de acordo com a polaridade dos radicais que constituem os aminoácidos presentes nela (TRINDADE et al., 2012).

Objetivo

2.1. Aula prática 1 - Identificação de aminoácidos e proteínas

De forma análoga, esta atividade prática traz, como seu objetivo, identificar de forma qualitativa a presença de aminoácidos e proteínas sob diferentes amostras através de dissemelhante tipos de reações (reativo de Biureto, reativo de Ninidrina e reação de Sakaguchi).

2.2. Aula prática 2 - Precipitação de proteínas

Já nesta prática deve-se ter a necessidade de identificar os principais fatores responsáveis pela precipitação de proteínas por meio da análise do ponto isoelétrico de cada amostra.

Materiais e Métodos

3.1. Aula prática 1

Materiais:

15 pipetas de Pasteur

12 tubos de ensaio

Chapa de aquecimento

Reagentes:

Reativo de Biureto

Solução de Ovoalbumina 2% (clara de ovo desidratada)

Solução de Ninidrina 0,1%

Solução de Alanina 0,1%

Solução de Prolina 0,1%

Leite

Solução de NaOH 2,5 M

Solução de 1- naftol 0,4%

Solução de Hipoclorito de Sódio 6-7%

Solução de Arginina 0,1%

Água destilada

Acessórios:

Estante para tubos de ensaio

Papel toalha

Frasco com água destilada

Descarte para pipetas

Método:

Como primeiro passo na primeira prática da primeira aula, identificou-se os três tubos de ensaio sob o auxílio de uma caneta: 1 Ovoalbumina, 2 leite e 3 água destilada. Após feito isso nos tubos, com o auxílio de uma pipeta de Pasteur, adicionou-se 40 gotas (2mL) do reativo de Biureto nos três tubos de ensaio. Posteriormente, no primeiro tubo adicionou-se 20 gotas (1mL) da solução de ovoalbumina, ao segundo 20 gotas (1mL) de leite e, no terceiro, 20 gotas (1mL) de água destilada. Após os reagentes serem acrescentados, agitaram-se os tubos, observou-se as reações ocorridas e anotou o ocorrido.

Já na segunda prática, utilizou-se 5 tubos de ensaio, os quais foram identificados, respectivamente, como: 1 Ovoalbumina, 2 Alanina, 3 Prolina, 4 leite e 5 água destilada. Logo em seguida, adicionou-se 40 gotas (2mL) da solução de Ovoalbumina ao primeiro tubo, posteriormente 40 gotas (2mL) da solução de alanina ao segundo tubo, 40 gotas (2mL) de Prolina ao terceiro tubo, 40 gotas (2mL) de leite ao quarto e 40 gotas (2mL) de água destilada ao quinto tubo. Para finalizar, acrescentou-se 10 gotas (0,5mL) da solução de Ninidrina em todos os tubos de ensaio, entretanto no tubo