Relatório Algocultura

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Centro de Ciências Agrárias, Ambientais e Biológicas

Engenharia de Pesca

Algocultura – CCA 396

Ana Caroline

José Antonio dos Santos Pereira

Tales

RELATÓRIO – AULA PRÁTICA

MÉTODO DE AVALIAÇÃO DA DENSIDADE DE CÉLULAS DE MICROALGAS

CRUZ DAS ALMAS

2017

1.0 – INTRODUÇÃO

Atualmente o consumo de biomassa de microalgas tem aumentado em produtos suplementares, principalmente obtida a partir de cultivos comerciais das espécies Chlorella e Spirulina cultivadas em tanques e lagoas abertas. O interesse pela utilização de microalgas para a produção de biocombustível e como solução para sequestro de dióxido de carbono CO2 tomou ênfase a partir da década de 70, através de um grande estudo realizado pelo NREL – National Renewable Energy Laboratory, nos EUA, conquistando assim um grande nicho de mercado.

A quantificação da densidade celular de microalgas é importante para que possamos definir a população do fitoplâncton do ambiente, caracterizando o ambiente quanto ao seu estado trófico e quantificar possíveis contaminações fazendo a comparação com outros trabalhos publicados, etc. Diversos métodos são utilizados para determinar a densidade celular, mas a Câmara de Neubauer tem se mostrado de grande utilidade, mesmo quando se utilizam métodos indiretos como: contadores de partículas, espectrofotômetro e turbidímetro; pois conseguem informações corretas e mostram o "estado" da população.

2.0 –OBJETIVO

A atividade prática em laboratório objetivou-se, capacitar os discentes do Curso de Eng. de Pesca da UFRB para a contagem de células de microalgas com o auxílio da Câmara de Neubauer e observar a curva de crescimento de uma cultura algal.

3.0 – MATERIAL E MÉTODOS

Em equipe, realizamos os seguintes procedimentos:

 Em um erlen de 250 ml foi adicionado 100 ml de meio de cultura (NPK) e 10 ml de inoculo (água verde). Em seguida o material foi homogeneizado e retirado uma amostra para assim dar início ao processo de contagem através da Câmara de Neubauer. O experimento foi realizado durante 22 dias, em dias alternados, sendo 10 amostras nos dias descritos: 24 amostra, 1(tempo zero), 26, 27 e 30 de janeiro, 01, 03, 06, 08, 10 e 14 de fevereiro do ano de 2017.

Material utilizado para a contagem:

- Câmara de Neubauer;

- Álcool;

- Papel absorvente;

- Microscópio óptico;

- Pipeta Pasteur;

- Lugol.

Para realizarmos a contagem das microalgas utilizamos os seguintes passos:

1) Certificar-se de que a lâmina e a lamínula estão devidamente limpas, caso contrário, realizar a limpeza com a utilização de álcool e papel;

2) Montar a Câmara de Neubauer de modo que a lamínula fique aderia à lâmina;

3) Preparar a amostra, as células móveis deverão ser adicionadas 2 gotas de lugol a fim de fixá-las;

4) Retirar uma pequena quantidade da amostra, com Pipeta Pasteur, e preencher um Retículo da Câmara de Neubauer de cada vez;

5) Esperar aproximadamente 1 minuto para que as células algais sedimentem;

6) Colocar a Câmara de Neubauer no microscópio e observar primeiramente com a

Objetiva 10 X, para encontrar os retículos, depois ajustar para o aumento de 40 X.

3.1 – Câmara de Neubauer

Câmara de Neubauer trata-se de uma lâmina espessa adaptada para contagem no microscópio. Aparenta se um porta objetos com uma depressão no centro de 0,1 mm de profundidade, cujo fundo é marcado com um quadrículo. O quadrado tem área de 3 x 3mm, com uma separação de 0,25mm entre as linhas. A área sombreada marcada com A, B, C, D corresponde a 1 milímetro quadrado. Para contagem de pequenas densidades de células (células grandes) são contados todos os 9 quadrados com objetiva de 10X ou de 40X. Para contagem de maior densidade de células (células pequenas) deverão ser contados todos os quadrados (A, B, C, D) externos com objetiva de 40X. Para contagem de células muito densas deverão ser contadas as células presentes nos quadrados internos com objetiva de 40X. O cálculo da densidade de células de microalgas existentes por ml (cel/ml) será o resultado médio de diversas contagens (nº conforme o desvio padrão) revertido para 1quadrado de 1mm X 1mm, multiplicado por 104, pois o volume de cada quadrado A, B, C, D é 0,1mm³. O resultado normalmente é expresso em 104 cel/ml. Se contarmos 5 dos quadrados do quadrado central (1, 2, 3, 4, 5), somamos todos, dividimos por 5 e multiplicamos por 25, para termos o resultado referente ao quadrado inteiro, o resultado x 104 cel/ml é a densidade celular.

4.0 – RESULTADOS E DISCUSSÕES

Depois de realizados os procedimentos, analisamos o crescimento das microalgas, obtendo os seguintes resultados na tabela abaixo:

Tabela 01: Resultados da contagem microalgas através da Câmara de Neubauer.

Data	Nº de Quadrados	Nº Cel/ml
24/01	25	2.250,000
26/01	25	4.500.000
27/01	25	5.250,000
30/01	25	5.500,000
01/02	25	6.750,000
03/02	25	5.000,000
06/02	25	3.250,000
08/02	25	2.500,000
10/02	25	3.750,000
14/02	25	2.750,000

4.1 – Linha de Crescimento

Com base nessas informações, podemos montar o gráfico da linha crescimento da seguinte forma: