A Química Analítica

Por meio do uso de técnicas físico-químicas, as análises clínicas foram  beneficiadas enormemente com os métodos quantitativos de análises que utilizam, por exemplo, a espectrofotometria (CISTERNAS, et al. 2005). Assim, tais reações puderam ser utilizadas para a determinação qualitativa e quantitativa de biomoléculas em diversas amostras, sendo então aplicadas às análises clínicas para diagnósticos de diabetes, lipidemias, colesterolemias, proteinúrias e produtos nitrogenados como ácido úrico, uréia e amônia, enzimas como amilase, lípase, fosfatase alcalina, fosfatase ácida, aminotransferases, lactato desidrogenas entre outras, além de íons como cálcio, sódio e potássio.

 2.1. Determinação de glicose pelo método da O-toluidina Nesse método a glicose reage com a o-toluidina (orto-toluil) em meio ácido e a quente, resultando glicosamina e base de Schiff correspondentes. Esta reação desenvolve cor azul que é proporcional à quantidade de glicose até 200 mg/dL presente na amostra que pode ser soro, plasma, urina ou liquor. Os valores normais do soro ou plasma é de 75 a 110mg/dL, sangue total de 80 a 120 mg/dL e urina zero (ausente) e a leitura espectrofotométrica é feita entre 600 a 650 nm. (CISTERNAS et al., 2005, p. 13) A dosagem de glicose é amplamente utilizada na determinação da glicemia. Esta dosagem torna-se extremamente importante no diagnóstico de doenças como a diabetes mellitus (tipo 1 e tipo 2), diabetes mellitus gestacional, diabetes tipo MODY (do inglês, Maturity onset diabetes of the young) (SBEM, 2004, p.3). Para o diagnóstico do diabetes, devem ser seguidos métodos e critérios específicos dos quais irão determinar glicemia casual, glicemia de jejum, glicemia pós-prandial, glicosúria entre outros sinais clínicos. 2.2. Determinação de Lipídios Totais Os lipídios totais incluem os triacilgliceróis, colesterol e seus ésteres, ácidos graxos não esterificados, fosfolipídeos, hormônios esteroidais e vitaminas lipossolúveis (CHAMPE et al., 2006, p. 171). O material que é utilizado é o soro do qual é aquecido em banho-maria fervente em presença de ácido sulfúrico concentrado. O reativo de fosfo-vanilina reage com uma fração de soluça sulfúrica, para formar um composto de coloração rósea, cuja intensidade de cor é proporcional à concentração de lipídios totais da amostra, sendo os valores normais de referência de 20 a 30 anos de idade de 400 a 700 mg/dL e acima dos 30 até 900 mg/dL e a leitura espectrofotométrica deve ser feita entre 500 a 550 nm. (CISTERNAS et al., 2005, p.15). 2.3. Determinação de Colesterol Total O método de Huang e colaboradores modificado tem como o princípio a precipitação de proteínas pelo anidro acético, retirando a água de solvatação das mesmas e, ao mesmo tempo, contribuindo para a formação de um complexo. Com a adição de ácido sulfúrico, o mesmo dissolve o precipitado, pois baixa o pH além do pI (ponto isoelétrico) das proteínas. Pela desidratação que ocorre no nível insaturado do núcleo do colesterol, forma-se um derivado sulfônico de coloração verde, cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração de colesterol existente na amostra (MOTTA, 2000, p.261). 2.4. Determinação de Proteínas Totais pelo Método do Biureto A reação do biureto é característica para identificação de proteínas, sendo positiva quando há no mínimo 3 ligações peptídicas (NEPOMUCENO e RUGGIERO, 10 2004, p.99). O biureto é formado pelo aquecimento da uréia a 180ºC, havendo a liberação de uma molécula de amônia. Soluções fortemente alcalinas de biureto, em presença de sulfato de cobre diluído, desenvolvendo uma coloração violeta. A coloração desenvolvida deve-se à formação de um complexo entre o íon cúprico (Cu++) e 4 átomos de nitrogênio. As proteínas dão positiva a reação pela existência das várias ligações peptídicas, formando-se o complexo entre duas cadeias adjacentes (HIRANO et al., 2001, p.81). O complexo formado entre o íon cúprico e as múltiplas ligações peptídicas das proteínas apresenta um ponto máximo de absorbância em 545nm (filtro verde do equipamento) (CISTERNAS et al., 2005, p. 16). 2.5. Determinação de Albumina Sérica pelo Método do Verde de Bromocresol A albumina é uma proteína plasmática que tema função de transportar diversas biomoléculas, como por exemplo, cálcio, hormônios entre outras (RHOADES E TANNER, 2005, p. 601). Segundo Cisterinas et al., (2005, p.16), a albumina possui a propriedade de se ligar a certos corantes, os quais mudam de cor ligados a ela, em meio tamponado. O verde de bromocresol, em pH 4.2, apresenta cor amarela e quando combinado à albumina adquire coloração verde, cuja intensidade é diretamente proporcional à concentração de albumina existente na amostra. Os valores normais são de 3,8 a 5,1 g/dL e a leitura espectrofotométrica é feita entre 600 a 650 nm.

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