Dosagem de Glicose no Sangue em Condições Normais e Patológicas

Relatório da Aula Prática

Título da Aula: Dosagem de glicose no sangue em condições normais e patológicas.

Disciplina: Bioquímica Metabólica.

Professor: Thiago Fernandes Martins.

Discentes:

Aquís Gabriel Barboza da Silva

Izabella Freitas Barros

Kauanny Wendy Paulino Reges

Samuel Fernandes Azevedo  

INTRODUÇÃO: DIABETES E ESPECTROFOTOMETRIA

O diabetes é uma síndrome metabólica de origem múltipla, decorrente da falta de insulina e/ou da incapacidade de a insulina exercer adequadamente seus efeitos, causando um aumento da glicose (açúcar) no sangue. O diabetes acontece porque o pâncreas não é capaz de produzir o hormônio insulina em quantidade suficiente para suprir as necessidades do organismo, ou porque este hormônio não é capaz de agir de maneira adequada (resistência à insulina). A insulina promove a redução da glicemia ao permitir que o açúcar que está presente no sangue possa penetrar dentro das células, para ser utilizado como fonte de energia. Portanto, se houver falta desse hormônio, ou mesmo se ele não agir corretamente, haverá aumento de glicose no sangue e, consequentemente, o diabetes.

A diabetes melito, por exemplo, é causada por uma hiperglicemia crônica e alterações no metabolismo do indivíduo, decorrentes de defeitos da ação da insulina. Essa hiperglicemia é o fator pela qual se da as grandes complicações da diabetes melito. (FERREIRA et all, 2011)  

A espectrofotometria é o método de análises óptico mais utilizado nas investigações biológicas e físico-químicas. Baseia-se na medida quantitativa da absorção da luz pelas soluções, onde a concentração na solução da substância absorvente é proporcional à quantidade de luz absorvida. Estas medidas são efetuadas por equipamentos denominados espectrofotômetros.

FUNDAMENTAÇÃO:

Método: Colorimétrico enzimático.

Princípio: Na presença de oxigênio atmosférico, a glicose é oxidada pela glucose-oxidase (GOD) em

gluconolactona. O peróxido de hidrogênio resultante é oxidado na presença de peroxidase (POD), 4-aminofenazona e fenol em 4-(p-benzoquinona-monoimino) fenazona. A intensidade cromática do corante vermelho é diretamente proporcional à concentração de glicose e é determinada fotometricamente, com máximo de absorção em 505 nm.

Glucose + O2 + H2O GOD gluconolactona + H2O2

2 H2O2 + 4-aminofenazona + fenol POD 4-(p-benzoquinonamonoimino)-fenazona + 4 H2O.[pic 1]

OBJETIVO:

Dosar glicose em soro humano.

MATERIAIS:

- Soro

Nota 2: As amostras de sangue deverão ser colhidas com anticoagulantes contendo fluoreto, ou então processadas (separação do soro e dosagem) no prazo máximo de 30 minutos. Amostras obtidas em anticoagulantes que não contenham fluoreto, têm sua glicose diminuída a uma velocidade de 7 mg/dl/h na temperatura ambiente e cerca de 2 mg/dl/h a 4ºC.

1. Reagente Enzimático: Solução aquosa de tampão pH 7,40, 4-aminoantipirina 0,8 mmol/L, fenol 11 mmol/L, glicose oxidase ³ 15.000 U/L, Peroxidase ³ 1000 U/L e p-hidroxibenzoato de metila 6,5 mmol/L. Conservar entre 2 - 8°C.

2. Padrão: Solução de ácido benzóico a 0,25% contendo glicose 100 mg/dL (5,56 mmol/L) em.

Conservar entre 2 - 8°C.

Outros materiais:

- Espectofotômetro ou aparelho semi-automático de medição colorimétrica (Ex: Bioplus)

- Cubeta

- Centrífuga

- Cronômetro

- Vidrarias (beckers, tubos de hemólise, tubos de ensaio, pipetas graduadas)

- Pipetas manuais, automáticas e micropipetas

- Água destilada ou deionizada

- Banho-maria mantido à temperatura constante (37 °C).

PROCEDIMENTO:

Separar 4 tubos de ensaio.

Valores coletados:

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria a 37 °C durante 15 minutos.

Determinar as absorbâncias do teste e do padrão em 505 nm acertando o zero com o branco.

A cor formada é estável por 60 minutos.

Para espectrofotômetros que requeiram volumes de leitura superiores aos indicados, usar

0,02 mL de Amostra ou Padrão e 2,0 mL de Reagente Enzimático.

   

RESULTADOS:

Conversão de unidade

Glicose (mmol/L) = mg/dL x 0,0556.

Amostra 1:   0,816 / 0,234 x 100 = 348,7179

348,7179 x 0,0556= 19,38

Amostra 2: 0,455 / 0,234 x 100 = 194,44

194,44 x 0,0556= 10,81

Amostra 3: 0,655 / 0,234 x 100 = 279,91

279,91 x 0,0556 = 15,56

AMOSTRA 1	AMOSTRA 2	AMOSTRA 3	PADRÃO
0,160	0,171	0,220	0,069
0,287	0,138	0,185	0,088
0,369	0,146	0,250	0,077

[pic 2]

Intervalo de Referência

Soro ou Plasma: Adultos: 70 a 99mg/dL (para pacientes com jejum noturno)

RN Prematuro: 20 a 60 mg/dL

RN a termo: 30 a 80 mg/dL                    

Observações importantes:

1. Para manusear e descartar reagentes e material biológico, aplicar as normas