Métodos Cromatográficos de Análise

Beatriz Usher Libório

Prof.ª. Dra. Maria Cristina Solci

Métodos Cromatográficos de Análise

Resenha - “The LCGC Blog: Sílica para fases estacionárias de HPLC - Um guia de cinco minutos”

A maioria das colunas de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) são empacotadas com sílica na qual alguma forma de ligante hidrofóbico está ligada. As colunas formam a grande maioria daqueles usados para HPLC de fase reversa moderna.

Características químicas e físicas da sílica podem ter impacto, quando não possuem grande papel na seletividade da separação quanto o ligante da fase ligada, sendo necessário entender o efeito do suporte da fase estacionária de sílica em nossas separações e o que fazer quando as coisas não estão indo conforme esperado.

As separações por HPLC requerem uma grande área superficial de material hidrofóbico para atuar como fase estacionária para a separação, havendo correlação entre a área da superfície e a eficiência dessa dada coluna.

Materiais de embalagem HPLC modernos de 5 mm de diâmetro de partícula ou inferior terão uma área de superfície entre 150 e 400 m²/g. A área de superfície de uma quadra de tênis média é de cerca de 260 m², 1g de sílica e, portanto, terá uma área de superfície entre a metade e o dobro do tamanho da quadra de tênis!

Colunas com grande área de superfície, grande volume de poros e alto teor de carbono será altamente retentivo para analitos hidrofóbicos e vice-versa. As partículas de sílica determinará a permeabilidade e a eficiência da coluna. Partículas menores geram maior eficiência, bem como maior contrapressão.

Uma espécie que é suscetível a ataque hidrolítico ao trabalhar com baixo eluente pH – significando que a fase é retirada do superfície de sílica. Nessas circunstâncias, um perda gradual de retenção ou eficiência ser notado juntamente com o aumento da cauda de pico de espécies polares e ionizadas.

Para “mascarar” o silanol restante grupos (que podem, sob certas circunstâncias, ser prejudicial para a análise), os fabricantes usam reagentes “end-capping”. Estes são tipicamente silanóis do tipo usado para a fase ligada

ligante, com cadeias alquil curtas ou um metil grupo para reduzir seu perfil estérico.

Sendo a natureza dos grupos silanol de superfície muito importante para determinar a seletividade de uma fase estacionária.

A maioria dos fabricantes usará várias técnicas para lavar a sílica para remover o metal íons - no entanto, isso pode levar a uma sílica que é mecanicamente menos estável e pode esmagar mais facilmente sob alta pressão condições de operação.

De maneira análoga, ao usar eluentes de pH alto, a matriz de sílica em si estará sujeito a hidrólise , o que resultará com que as partículas de sílica se dissolvam, causando um vazio de coluna e um redução na eficiência com picos de cauda ou ombros, geralmente combinados com um aumento gradual na contrapressão do sistema.