O Relatório Bioquímica

[pic 1]

[pic 2]

        [pic 3]

ANÁLISE FOTOMÉTRICA DA GLICOSE COM DNS

 (AULA PRÁTICA Nº 1)

Prof. º Ricardo Branco

Alunos:
Anna Carolina Silva de Jesus Passaes – Matrícula 216078090

Isadora Gonçalves de Souza – Matrícula 217078121
Bryan – Matrícula

VOLTA REDONDA - RJ
2019

1. OBJETIVO

Determinar a concentração de glicose em uma amostra de melaço comercial, a partir do método DNS.

1. MATERIAIS E MÉTODOS

A partir de uma solução estoque de glicose equivalente a 0,05 mol/L, transferiu-se um alíquota de 10 mL da mesma, com o auxílio de uma pipeta graduada, para um balão volumétrico de 100 mL. O balão foi ajustado com água destilada e devidamente homogeneizado. Em seguida, tomou-se alíquotas de 4 mL, 5 mL, 6 mL, 7 mL, 8 mL dessa nova solução padrão de glicose munindo-se de pipetas graduadas, transferindo-as para balões volumétricos de 10 mL, que foram devidamente identificados, ajustados com água destilada e homogeneizados. Pipetou-se uma alíquota de 1 mL de cada um desses 5 balões volumétricos para 5 tubos de ensaios diferentes que foram numerados de 1 à 5. Um sexto tubo foi preparado e identificado como B com 1 mL de água destilada pura para e fosse utilizado como branco. Posteriormente, adicionou-se a todos os tubos de ensaio, 1 mL de solução de DNS, com auxílio de uma pipeta graduada. Todos os tubos foram agitados e levados para o banho maria à 100°C por aproximadamente 7 minutos. Após a retirada dos tubos, adicionou-se 13 mL de água destilada a cada um dos 6 tubos de ensaios preparados. Os mesmos foram homogeneizados, e finalmente, efetuou-se a leitura das absorbâncias no espectrofotômetro utilizando um ƛ = 540 ɳm e o ensaio branco como marcador inicial. Por fim, plotou-se um gráfico de absorbância x concentração.

1. RESULTADOS E DISCUSSÕES

Primeiramente realizou-se o cálculo da concentração da solução padrão de glicose preparada a partir da solução mãe 0,05 mol/L disponibilizada no laboratório, conforme a equação 1:

M1 x V1 = M2 x V2

(Equação 1)

onde: M1 = molaridade da solução mãe (0,05 mol/L)

           V1 = volume da solução pipetado (0,01 L)

           M2 = molaridade da solução padrão (M2)

          V2 = volume da solução padrão (0,10 L)

0,05 x 0,01 = M2 x 0,10[pic 4]

M2 = 0,005 mol/L

        A partir disso, calculou-se a concentração de cada um dos 5 balões volumétricos preparados de acordo com a equação 2:

C1 x V1 = C2 x V2

(Equação 2)

onde: C1 = concentração da solução de glicose padrão (0,005 mol/L)

           V1 = volume da solução de glicose padrão (0,004 L)

           C2 = concentração da glicose no balão volumétrico (C2)

           V2 = volume de glicose no balão volumétrico (0,01 L)

0,005 x 0,003 = C2 x 0,01[pic 5]

C2 = 2,0 x 10-3 mol/L

        O mesmo cálculo foi realizado para as outras 4 medidas: 5 mL, 6 mL, 7 mL e 8 mL, e os resultados estão descritos na Tabela 1:

Tabela 1: Diluição da solução padrão para 6 balões volumétricos

Balão Volumétrico	Volume sol. Padrão (mL)	Concentração final (mol/L)
1	4	2,0 x 10-3
2	5	2,5 x 10-3
3	6	3,0 x 10-3
4	7	3,5 x 10-3
5	8	4,0 x 10-3

         Já nos tubos de ensaio devidamente ajustados, a solução de glicose + DNS apresentou coloração amarelo intenso, cor semelhante à solução de DNS pura. Quando levadas ao aquecimento severo, as mesmas soluções se tornaram acastanhadas, cor associada ao produto da reação entre o açúcar e o DNS, o ácido 3-amino-5-nitrosalicílico[1].

        A glicose possui seu grupo carbonílico livre, sendo capaz de oxidar em presença de agentes oxidantes em solução alcalina portanto, considerada um açúcar redutor. Essa oxidação ocorre apenas com o monossacarídeo em sua forma linear (que está em equilíbrio com sua estrutura cíclica), dessa forma, o carbono carbonílico é oxidado a um grupo carboxílico[2].

[pic 6]

(Figura 1: Fórmula estrutural da glicose)

O ácido 3,5-dinitrosalicílico (agente oxidante presente no DNS) reage com o carbono carbonílico de açúcares redutores em meio alcalino, no caso o da glicose, e se reduz a ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, um composto de coloração acastanhada cuja absorbância máxima de luz se dá em 540 nm[2]. A reação redox foi realizada sob aquecimento a fim de acelerar a reação. É válido dizer que observou-se que, ao aumentar a concentração em cada tudo de ensaio a cor se intensificava, isso devido ao poder redutor da glicose[1].