OBTENÇÃO DE CULTURAS PURAS, VIABILIDADE CELULAR DE LEVEDURAS E TÉCNICA DA COLORAÇÃO DE GRAM

OBTENÇÃO DE CULTURAS PURAS, VIABILIDADE CELULAR DE LEVEDURAS E TÉCNICA DA COLORAÇÃO DE GRAM

1-INTRODUÇÃO

Para o estudo, classificação e utilização de espécies microbianas em processos fermentativos, torna-se necessário que a mesma esteja pura, condição obtida quando se realiza um isolamento de forma adequada. Muitas das vezes, o isolamento requer um conjunto de etapas que visam separar a colônia desejada de outras contaminantes. Cada gênero ou espécie microbiana tem um meio de cultura adequado para seu crescimento, além do fato de muitos deles possibilitarem a identificação das espécies através da expressão de características bioquímicas peculiares que as mesmas possuem. Atualmente, várias técnicas de coloração estão sendo utilizadas para identificação de endósporos, cápsulas de bactérias e flagelos, no entanto a maior aplicabilidade da coloração de micro-organismos é a técnica de Gram, que identifica as bactérias Gram positivas das Gram negativas, pelo fato de possuírem parede celular com características distintas.

2-MATERIAIS E MÉTODOS

2.1-Isolamento da levedura da uva (Aula 1)

Umedecer a ponta do swab em solução salina estéril. Colocar o mesmo em contato com a parte branca em torno do pendúnculo da uva. Realizar a técnica do esgotamento no meio ABD.

2.2-Condições de incubação da levedura

Incubar as placas a 30oC, em estado estacionário. As amostras podem ser retiradas após crescimento da levedura.

2.3-Verificar a viabilidade da colônia isolada (Aula 2)

Colocar 1 gota de solução azul de metileno e 3 gotas de suspensão de levedura em um Becher.

Homogeneizar.

Transferir com a pipeta Pasteur para a câmara de Neubauer.

Examinar no microscópio.

2.4-Obtenção de culturas puras (Aula 1)

Com o auxílio de uma alça de platina, previamente esterilizada, retira-se uma amostragem de cada meio de cultivo contendo as células bacterianas e, em seguida, procedendo a utilização de um dos métodos das estrias para a obtenção da cultura pura. Para cada espécie microbiana serão utilizadas condições adequadas para tipo de meio de cultura e condições de incubação.

Linhagem Meio de crescimento Condições de incubação

2.5- Procedimento de coloração de Gram (Aula 2)

Transferir, com auxílio da alça de platina flambada, uma pequena gota de água para a lâmina. Esterilizar a alça, recolher uma quantidade mínima da cultura, e em seguida, misturar com a gota de água. Secar a lâmina em ar quente.

Cobrir o esfregaço com solução de cristal violeta (Gram 1) por 2 a 3 minutos e lavar em água corrente.

Cobrir a lâmina com solução de lugol (Gram 2) por 1 minuto. Escorrer a solução.

Lavar a lâmina com álcool 95% (Gram 3) por 5 a 15 segundos e, em seguida, lavar em água corrente.

Cobrir o esfregaço com safranina (Gram 4) durante 30 segundos e lavar bem. Secar a lâmina com lenço de papel ou ar quente.

2.6-Verificação da coloração das linhagens bacterianas

Examinar, em microscópio utilizando óleo de imersão, as lâminas preparadas conforme descrito no item anterior. As linhagens Gram negativas apresentarão cor avermelhada enquanto as Gram positivas serão arroxeadas.

OBTENÇÃO DE CULTURAS PURAS, VIABILIDADE CELULAR DE LEVEDURAS E TÉCNICA DA COLORAÇÃO DE GRAM

1-INTRODUÇÃO

Para o estudo, classificação e utilização de espécies microbianas em processos fermentativos, torna-se necessário que a mesma esteja pura, condição obtida quando se realiza um isolamento de forma adequada. Muitas das vezes, o isolamento requer um conjunto de etapas que visam separar a colônia desejada de outras contaminantes. Cada gênero ou espécie microbiana tem um meio de cultura adequado para seu crescimento, além do fato de muitos deles possibilitarem a identificação das espécies através da expressão de características bioquímicas peculiares que as mesmas possuem. Atualmente, várias técnicas de coloração estão sendo utilizadas para identificação de endósporos, cápsulas de bactérias e flagelos, no entanto a maior aplicabilidade da coloração de micro-organismos é a técnica de Gram, que identifica as bactérias Gram positivas das Gram negativas, pelo fato de possuírem parede celular com características distintas.

2-MATERIAIS E MÉTODOS

2.1-Isolamento da levedura da uva (Aula 1)

Umedecer a ponta do swab em solução salina estéril. Colocar o mesmo em contato com a parte branca em torno do pendúnculo da uva. Realizar a técnica do esgotamento no meio ABD.

2.2-Condições de incubação da levedura

Incubar as placas a 30oC, em estado estacionário. As amostras podem ser retiradas após crescimento da levedura.

2.3-Verificar a viabilidade da colônia isolada (Aula 2)

Colocar 1 gota de solução azul de metileno e 3 gotas de suspensão de levedura em um Becher.

Homogeneizar.

Transferir com a pipeta Pasteur para a câmara de Neubauer.

Examinar no microscópio.

2.4-Obtenção de culturas puras (Aula 1)

Com o auxílio de uma alça de platina, previamente esterilizada, retira-se uma amostragem de cada meio de cultivo contendo as células bacterianas e, em seguida, procedendo a utilização de um dos métodos das estrias para a obtenção da cultura pura. Para cada espécie microbiana serão utilizadas condições adequadas para tipo de meio de cultura e condições de incubação.