Relatório de Bioquímica: Titulação de aminoácidos

   

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Coordenadoria de Biotecnologia

Curso de Bioquímica

Prática: Titulação de aminoácidos: método potenciométrico

Alunos:

Turma: PMQ 351

Professor:

Data da realização da prática:

Data da entrega do relatório:

Avaliação:

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1. Introdução

    Os aminoácidos são biomoléculas caracterizadas pelos seus agrupamentos, amino, carboxílico e uma cadeia lateral. A cadeia lateral são agrupamentos de moléculas que diferenciam os aminoácidos uns dos outros. De acordo com os agrupamentos da cadeia lateral podemos classificar os aminoácidos como:

• Aminoácidos apolares: os agrupamentos que compõe a cadeia lateral são moléculas orgânicas apolares como hidrocarbonetos e cadeias aromáticas. Ex: Valina e leucina
• Aminoácidos polares: os agrupamentos que compõe a cadeia lateral são moléculas orgânicas polares como amidas, álcoois, fenóis etc. Ex: Serina e cisteína.
• Aminoácidos ácidos: um dos agrupamentos que compõe a cadeia lateral é um ácido carboxílico. Ex: ácido glutâmico e ácido aspártico .
• Aminoácidos básicos: dos agrupamentos que compõe a cadeia lateral é uma amina. Ex: Lisina e arginina.

Além da classificação baseada nos agrupamentos que formam a cadeia lateral dos aminoácidos há também uma classificação nutricional para os aminoácidos. Os aminoácidos que são sintetizados pelo próprio organismo vivo é denominado aminoácido não essencial. Ex: Alanina e serina. Enquanto que os aminoácidos essenciais são aqueles onde o organismo o adquire a partir de sua ingestão, ou seja, os aminoácidos essenciais não são sintetizados pelo próprio organismo. Ex: Cisteina e glicina. A ingestão desses aminoácidos essenciais é de extrema importância, visto que os aminoácidos possuem diversas funções, sendo uma das principais a composição de proteínas.

No caso dos seres humanos há 20 aminoácidos principais sendo constituídos por aminoácidos essenciais e aminoácidos não essenciais. Os aminoácidos essenciais são adquiridos a partir da nossa alimentação, por isso é necessário que se tenha uma alimentação balanceada para que não ocorra uma deficiência de aminoácidos em nosso organismo.

A ligação entre aminoácidos se denomina ligação peptídica essa ligação ocorre entre os agrupamentos carboxílico e amino dos aminoácidos gerando a saída de uma molécula de água. Uma cadeia de aminoácidos ligados gera uma proteína. A seqüência de aminoácidos ligados determina a forma e a função da proteína a ser formada. A proteína é uma molécula de extrema importância para a manutenção da vida de qualquer ser vivo, visto que a mesma possui uma variedade de funções bioquímicas.

        

        Vale ressaltar que a formação de uma proteína é um processo do qual não pode haver erros, pois um único erro pode gerar problemas irreversíveis ou até mesmo uma deformação da proteína, como exemplo pode-se citar a anemia falciforme que é uma doença causada pela má formação da proteína hemoglobina do sangue. Essa doença é causada pela troca do aminoácido ácido glutâmico pelo aminoácido valina na cadeia polipeptídica da hemoglobina.

Os aminoácidos foram descobertos a partir da focalização das moléculas de proteínas, o primeiro aminoácido descoberto foi a asparagina em 1806. A asparagina é um aminoácido proveniente dos aspargos por isso o nome asparagina.

1. Objetivo

O objetivo desta prática tem como finalidade identificar e construir a curva de titulação de  aminoácidos através do método de titulação potenciométrica, além de localizar as zonas de tamponamento, os pKs, o ponto isoelétrico e  cargas elétricas, visando assim a identificação dos mesmos.

 

1. Materiais e métodos

1. Material

• 50 mL Solução de aminoácido 1, 2 ou 3 - 10mM diluídos em HCl 20mM
• 25 mL Solução de NaOH 0,25M
• Becher
• Micropipetas da Kasvis de 20 -200μL
• Micropipetas da Kasvis de 100 -1000μL
• pHmetro da Metrohm
• Barra de agitaçao magnética
• Agitador magnético
• Peras, pipetadores automáticos, proveta,etc.

1. Métodos

Inicialmente mediu-se o pH inicial da solução de α-L aminoácido e foi montado o sistema para titulação potenciométrica como o esquema do roteiro, com o pHmetro, potenciômetro, a barra de agitação e o becker com a amostra com o potenciômetro funcionando.

Foram medidos 50 mL da solução de aminoácidos no Becker, logo após foi colocada a barra magnética dentro desta solução, de forma que a barra não ficasse encostada no eletrodo. Depois esse becker foi posto sobre a placa de agitação e lentamente foi-se aumentando a velocidade do agitador da solução e foi medido o pH dessa solução e registrado como valor inicial da titulação.

Após isso, a solução foi titulada com NaOH aferindo e anotando o pH do sistema conforme os valores indicados no roteiro, a cada  0,4 uL ou 0,2 uL do ácido adicionado.

Depois de titulada a amostra, a alíquota de α-L aminoácido é descartada, o eletrodo e a barra de agitação lavados com água destilada. Com base nos resultados obtidos foi montada uma tabela com os valores de pH e os volumes de base adicionados.

1.     Resultados

Adição	Volume mL de NaOH (0,25 M)	pH (Solução A)	pH (Solução B)	pH (Solução C)
0	--	2,02	1,86	1,77
1	0,4	2,12	1,92	1,83
2	0,4	2,23	1,98	1,88
3	0,4	2,37	2,06	1,95
4	0,2	2,45	2,10	1,99
5	0,2	2,56	2,15	2,03
6	0,2	2,70	2,20	2,07
7	0,2	2,89	2,25	2,11
8	0,2	3,22	2,31	2,16
9	0,2	5,66	2,37	2,22
10	0,2	8,09	2,44	2,27
11	0,2	8,51	2,52	2,34
12	0,2	8,79	2,61	2,41
13	0,2	9,01	2,71	2,49
14	0,2	9,21	2,84	2,58
15	0,2	9,41	2,99	2,68
16	0,2	9,63	3,20	2,79
17	0,2	9,90	3,58	2,92
18	0,2	10,27	5,90	3,07
19	0,2	10,69	8,54	3,22
20	0,2	11,07	9,03	3,37
21	0,2	11,31	9,30	3,52
22	0,2	11,46	9,50	3,66
23	0,2	11,57	9,66	3,82
24	0,2	11,66	9,81	3,98
25	0,2	11,73	9,96	4,17
26	0,2	11,80	10,10	4,40
27	0,2	11,85	10,25	4,76
28	0,2	11,90	10,41	5,79
29	0,2	11,94	10,59	8,65
30	0,2	11,98	10,80	9,19
31	0,2	12,01	11,02	9,46
32	0,2	12,05	11,22	9,66
33	0,2	12,08	11,38	9,83
34	0,2	12,10	11,50	9,98
35	0,2	12,13	11,61	10,12
36	0,2	12,15	11,69	10,26
37	0,2	12,17	11,75	10,41
38	0,2	12,19	11,81	10,56
39	0,4	12,23	11,91	10,91
40	0,4	12,26	11,99	11,27
41	0,4	--	12,04	11,52
42	0,4	---	--	11,69
43	0,4	--	--	11,82
44	0,4	--	--	11,91
45	0,4	--	--	11,99
46	0,4	--	--	12,05