A Eletroforese é o movimento de partículas dispersas num fluido sob influência de um campo elétrico

Eletroforese

A Eletroforese é o movimento de partículas dispersas num fluido sob influência de um campo elétrico. A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar fragmentos de DNA (ou outras macromoléculas, como o RNA e proteínas) com base no tamanho e carga.

                        Agarose não tóxica! Gel horizontal_DNA                                                                                                                        (0,2-50kb)  [pic 1]

                        Poliacrilamida neurotóxica! Gel vertical_Proteína                                                                                       (fragmentos pequenos até 1kb)

 Todas as moléculas de DNA têm a mesma quantidade de carga por massa. Por essa razão, a eletroforese em gel de fragmentos de DNA faz a separação baseada apenas no tamanho. O princípio é baseado no fato da molécula de DNA possuir carga negativa em valores de pH neutro ou alcalino e quando aplicado ou imerso em uma matriz de gel submetida a um campo elétrico, migra em direção ao polo positivo (anôdo). Um fragmento de DNA possui uma mobilidade eletroforética         que decresce em proporção ao logaritmo do seu tamanho em pares de bases

Para a separação de proteínas esta deve ser desnaturada com detergente SDS para obter carga negativa.

Através do uso da eletroforese, podemos ver quantos diferentes fragmentos de DNA estão presentes em uma amostra, e o quão grandes eles são em relação aos outros. Podemos também determinar o tamanho absoluto de um pedaço de DNA examinando-o ao lado de um DNA "padrão", composto de fragmentos de DNA de tamanhos conhecidos. 

Géis para separação de DNA são muitas vezes feitos de um polissacarídeo chamado agarose, que vem na forma de flocos secos em pó. Agarose: um polissacarídeo extraído de algas marinhas, formado por resíduos de D e L galactose unidos por ligações glicosídicas α (1-3) e β (1-4), é um material gelatinoso e semelhante a gelatina incolor. 

Quando a agarose é aquecida em um tampão (água com alguns sais) e deixada para esfriar, forma um gel sólido ligeiramente mole. No nível molecular, o gel é uma matriz de moléculas de agarose que são mantidas unidas por ligações de hidrogênio e formam micro poros. Forma uma rede que segura as moléculas durante a migração.

Fatores que afetam a migração:

• Tamanho da molécula
• Concentração do gel

• Define o tamanho dos poros
• Conformação do DNA

• Força elétrica aplicada
• Presença de corantes intercalantes
• Composição do tampão

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