Analise Microorganismos

UNIVERSIDADE REGIONAL DO NOROESTE DO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO GRANDE DO SUL

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E QUÍMICA

QUÍMICA INDUSTRIAL DE ALIMENTOS

ESTÁGIO II

RELATÓRIO DE ESTÁGIO II

CARACTERIZAÇÃO POR SUSCEPTIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS, PCR-RIBOTIPIFICAÇÃO DE Salmonella spp. ENVOLVIDAS EM SALMONELOSES OCORRIDAS NO RIO GRANDE DO SUL, NOS ANOS DE 1999 ATÉ 2005

UFRGS – Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

ICTA – Instituto de Ciência e Tecnologia de Alimentos, Av. Bento Gonçalves, 9500 – Prédio 43212 – CEP 91540-000 – Porto Alegre/RS.

Fone: 51 3316.6681.

[e-mail].

LEIDI DAIANA PREICHARDT

ORIENTADORA: Profa. ÂNGELA FIORENTINI

Santa Rosa

2006.

LEIDI DAIANA PREICHARDT

RELATÓRIO DE ESTÁGIO II

CARACTERIZAÇÃO POR SUSCEPTIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS, PCR-RIBOTIPIFICAÇÃO DE Salmonella spp. ENVOLVIDAS EM SALMONELOSES OCORRIDAS NO RIO GRANDE DO SUL, NOS ANOS DE 1999 ATÉ 2005.

Relatório Acadêmico apresentado à disciplina Estágio II do Departamento de Biologia e Química da Universidade Regional do Noroeste do Estado e do Rio Grande do Sul e Universidade Estadual do Rio Grande do Sul, como nota parcial para a conclusão do componente curricular, no curso de Química Industrial de Alimentos.

Orientadora: Ângela Fiorentini

Santa Rosa

2006.

ESTÁGIO CURRICULAR II

LOCAL DO ESTÁGIO: ICTA – Instituto de Ciência e Tecnologia de Alimentos, UFRGS – Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Av. Bento Gonçalves, 9500 – Prédio 43212 – CEP 91540-000 – Porto Alegre/RS. Fone: 51 3316.6681. E-mail: [e-mail].

PERÍODO: 04 de Janeiro a 31 de Janeiro de 2006

DURAÇÃO: 150 horas

EQUIPE TÉCNICA:

ÂNGELA FIORENTINI

Professora Orientadora – UNIJUÍ

LEIDI DAIANA PREICHARDT

Estagiária – UNIJUÍ/UERGS

EDUARDO TONDO

Supervisor do Estágio – UFRGS

FERNANDA ARBOITE DE OLIVEIRA

Doutoranda da UFPEL

CHEILA MINÉIA DANIEL DE PAULA

Bolsista – UFRGS

SUMÁRIO

LISTA DE TABELAS 6

LISTA DE FIGURAS 8

RESUMO 10

INTRODUÇÃO 11

1 AGENTES ANTIMICROBIANOS 13

1.1 CONTROLE DE MICRORGANISMOS POR AGENTES QUÍMICOS [1] 13

1.2 CONDIÇÕES QUE INFLUENCIAM A ATIVIDADE MICROBIANA [1] 14

1.3 MECANISMO DE AÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS [2] 14

1.3.1 Inibidores da Síntese da Parede Celular [2] 15

1.3.2 Antibióticos que inibem as funções da membrana citoplasmática [2] 16

1.3.3 Antibióticos que inibem a síntese de ácidos nucléicos e proteínas 16

1.3.3.1 Aminoglicosídeos 17

1.3.3.2 Tetraciclinas [3] 18

1.3.3.3 Cloranfenicol 18

1.3.4 Agentes Quimioterápicos Sintéticos [2] 19

1.3.4.1 As Sulfonamidas [2] 19

1.3.4.2 Quinolônicos [2] 20

1.4 DESENVOLVIMENTO DE BACTÉRIAS RESISTENTES AOS ANTIBIÓTICOS [2] 20

1.5 TRANSFERÊNCIA DA RESISTÊNCIA AOS ANTIBIÓTICOS [2] 21

1.6 OUTRAS APLICAÇÕES DOS ANTIBIÓTICOS [2] 24

1.6.1 Antibióticos como Suplemento de Ração Animal 25

1.7 TÉCNICA DE ANTIBIOGRAMAS ATRAVÉS DOS DISCOS DE SENSIBILIDADE EM PLACA 27

2 AMPLIFICAÇÃO DE DNA (REAÇÃO EM CADEIA PELA POLIMERASE) 29

2.2 OTIMIZAÇÃO DA PCR [8] 35

2.2.1 [MgCl2] 35

2.2.2 Tampão 35

2.2.3 Enzima 35

2.2.4 Desenho do “primers” 35

2.2.5 Solução do DNA “tamplate” 36

2.2.6 Quantidade de DNA 36

2.3 ANÁLISE ELETROFORÉTICA EM GEL DE AGAROSE 36

2. 3.1 Fatores que influenciam a migração em gel de agarose 37

3 MATERIAIS E MÉTODOS 39

3.1 AMOSTRAS DE Salmonella spp. 39

3.2 TESTE DE SUSCEPTIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS 39

3.2.1 Procedimento 39

3.2.2 Antibióticos Testados 41

3.2.3